殼聚糖成膜劑聯(lián)合EGF在兔深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、 目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)離體細(xì)胞水平和建立兔深Ⅱ度燙傷自身對(duì)照模型,研究殼聚糖成膜噴劑聯(lián)合表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子噴霧劑(EGF)對(duì)兔深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面的早中期的治療效果及其創(chuàng)面愈合的相關(guān)影響機(jī)制。通過(guò)觀察創(chuàng)面愈合的大體肉眼觀、創(chuàng)面愈合率的計(jì)算、痂下細(xì)菌計(jì)數(shù)、創(chuàng)面病理學(xué)觀察、創(chuàng)面組織羥脯氨酸(Hyp)含量變化、ki67 在創(chuàng)面的分布和表達(dá)水平,探討聯(lián)合用藥在燙傷早中期治療的協(xié)同優(yōu)勢(shì)及其應(yīng)用前景。
方法：選取健康清潔級(jí)新西蘭大白兔24只,以

2、兔脊柱為中間線在背部?jī)蓚?cè)用水燙法建立6個(gè)對(duì)稱的兔深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面,上端兩個(gè)創(chuàng)面為實(shí)驗(yàn)組(A組：殼聚糖成膜劑聯(lián)合EGF組),中間兩個(gè)創(chuàng)面為對(duì)照組1 (B組：EGF組),下端兩個(gè)創(chuàng)面為對(duì)照組2(C組：殼聚糖組),A組致傷后,先將EGF噴涂于創(chuàng)面,至藥液不外流為止,1分鐘后再將殼聚糖噴涂于創(chuàng)面,待其自然成膜后,包扎固定。B組致傷后, 僅在創(chuàng)面噴涂EGF至藥液不外流為止,包扎固定。C組致傷后,僅在創(chuàng)面噴涂殼聚糖,待其自然成膜后,包扎固定。每24h

3、創(chuàng)面再次給藥,更換外敷料,肉眼觀察三組創(chuàng)面大體形態(tài)變化及愈合情況。選取3d、7d、10d、14d 四個(gè)觀察時(shí)相點(diǎn),每個(gè)時(shí)相點(diǎn)隨機(jī)抽取 6 只兔子,將抽取的6只兔子空氣栓塞處死,用稱量紙描繪計(jì)重得出創(chuàng)面面積并計(jì)算創(chuàng)面愈合率。在嚴(yán)格無(wú)菌操作下,切取燙傷創(chuàng)面焦痂及痂下組織塊1.0g,處理后行培養(yǎng),計(jì)算每克創(chuàng)面組織的細(xì)菌群落總數(shù)。再取兔子背部創(chuàng)面100mg組織,處理后行組織羥脯氨酸(Hyp)含量測(cè)定。剩余的標(biāo)本組織一部分切片HE染色后觀測(cè)病理學(xué)

4、指標(biāo),一部分標(biāo)本行ki67特異性抗體染色后觀察免疫組化指標(biāo)。結(jié)果：創(chuàng)面大體觀察,A組創(chuàng)面較B、C兩組創(chuàng)面,創(chuàng)周炎性反應(yīng)輕,痂殼松軟,創(chuàng)面縮小速度快。創(chuàng)面愈合率的比較,A組明顯高于B、C兩組,B、C兩組之間的差異則不明顯。創(chuàng)面組織病理學(xué)標(biāo)本鏡下觀察見(jiàn),A 組創(chuàng)面較 B、C 兩組創(chuàng)面,壞死組織與創(chuàng)面附著松散,炎性細(xì)胞趨化聚集速度快,內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯,膠原纖維增生活躍,新生上皮排列整齊。痂下細(xì)菌菌落數(shù)(CFU/g)陽(yáng)性檢出率A組陽(yáng)性檢出率低于

5、B組,B組高于C組,A、B兩組差異不明顯。組織羥脯氨酸(Hyp)含量檢測(cè),A組Hyp含量增長(zhǎng)速度快于B組,C組優(yōu)于B組,A、C兩組之間差異不大。ki67免疫組化分析,A組創(chuàng)面較B、C兩組創(chuàng)面,陽(yáng)性細(xì)胞聚集緊密,量多,著色深,排列整齊。ki67指數(shù)陽(yáng)性率比較,A、B兩組之間差異不明顯,A、B 兩組與 C 組的差異均較明顯。結(jié)論：兩種藥物聯(lián)合使用能夠加強(qiáng)兔深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面的愈合能力,并能彌補(bǔ)單一用藥的缺陷。能全面發(fā)揮其抑制創(chuàng)面細(xì)菌生長(zhǎng),加快上