阿魏酸鈉對單側輸尿管結扎大鼠骨橋蛋白和CD44表達的影響.pdf

1、目的：腎間質纖維化(Renal interstitinal fibrosis，RIF)是各種慢性腎損害的共同特征。與腎小球硬化相比，腎間質纖維化的程度與腎功能損害的程度有更高的相關性，故常以間質纖維化作為評價各種腎臟病進展程度的可靠指標。 腎間質纖維化的發(fā)病機制及因素較多，其中腎間質巨噬細胞的積聚程度與隨后相應部位的纖維化程度密切相關，是啟動腎間質纖維化病變的重要始動環(huán)節(jié)。由于間質的巨噬細胞來源于血液中的單核細胞，因此腎間質產生

2、的趨化因子在該過程中發(fā)揮重要作用。而骨橋蛋白(osteopontin OPN)是吸引腎間質巨噬細胞最重要的趨化因子，其表達量與間質炎癥和纖維化程度密切相關。OPN不但趨化循環(huán)中的單核巨噬細胞到腎小管間質，而且直接刺激腎固有細胞如腎小管上皮細胞，啟動或擴大炎癥反應，而炎癥反應可導致腎小管變性損傷，繼而腎間質成纖維細胞活化、腎小管萎縮消失。研究發(fā)現(xiàn)在腎小管最初受損時，OPN還可促進腎小管上皮細胞再生和重建，幫助其功能的恢復，但隨著病情的發(fā)展

3、，病變逐漸嚴重，這種作用失代償。由此可推斷通過局部阻斷OPN因子，抑制單核巨噬細胞在腎間質的聚集與增殖，可達到減輕炎癥反應，減輕腎小管損傷、抑制纖維化的目的。CD44是OPN的主要配體，已有的研究表明，CD44在炎癥過程中發(fā)揮重要作用。 阿魏酸鈉(sodium ferulate，SF)是阿魏酸的合成鈉鹽，普遍存在于當歸、川芎等常用植物藥中，水溶性好，已證實SF為一種非肽類內皮素受體拮抗劑，可清除自由基，防治脂質過氧化損傷；拮抗內

4、皮素引起的血管收縮、升壓、血管平滑肌細胞增殖，減輕血管內皮損傷、增加一氧化氮(NO)合成、松馳血管平滑肌等特征，可以延緩腎間質纖維化，發(fā)揮保護腎功能的作用。目前尚未檢索到阿魏酸鈉在UUO模型中對于OPN及CD44調節(jié)作用，本實驗選用經(jīng)典的UUO模型來進行小管間質纖維化發(fā)病機制及干預的實驗研究，通過病理及免疫組化的方法觀測腎臟中OPN及CD44的表達情況，并觀察經(jīng)阿魏酸鈉干預后，OPN、CD44及單核巨噬細胞抗原陽性(ED-1+)細胞表達

5、的改變情況，以闡明OPN參與了腎間質纖維化的發(fā)生發(fā)展及阿魏酸鈉發(fā)揮腎臟保護作用機理之一是通過下調OPN和CD44的表達。 方法：選擇清潔級健康雄性SD大鼠54只，體重(210±10)克，隨機分為三組：假手術組(A組n=18)，輸尿管結扎組(B組n=18)，阿魏酸鈉治療組(C組n=18)。將各組大鼠以水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉后，行左側恥骨上切口，沿左腎下極尋找到左側輸尿管，在中上1/3處用4號線上下結扎兩處，然后從

6、中剪斷輸尿管，以防逆行性感染，A組除不結扎和剪斷輸尿管外，其他手術過程同前。術后各組大鼠均正常飲食。A組和B組大鼠用生理鹽水2ml灌胃，1次/日；C組大鼠以阿魏酸鈉混懸液110mg/kg/d灌胃，1次/日。三組均于術前一天開始灌胃至術后第3、7、14d每組大鼠各取6只處死，快速取出左腎，按冠狀位縱形切開，取腎組織的1/2置于10％福爾馬林固定液固定48小時，然后行石蠟包埋，制成5μm切片，分別用于光鏡、蘇木蘇伊紅染色(HE染色)、馬松染

7、色(Masson染色)觀察腎臟病理改變，采用免疫組織化學染色測定OPN、CD44的表達及腎間質單核巨噬細胞數(shù)的變化，結果應用圖像分析系統(tǒng)進行半定量分析。實驗結果均以均數(shù)±標準差(-x±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，相關分析采用直線相關分析，應用SPSS 11.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。結果：光鏡下觀察，HE及Masson染色A組未見異常，B組及C組各時相點大鼠腎臟腎小球無明顯變化。HE

8、染色B組術后3天腎小管擴張不明顯，間質中少量單核細胞與淋巴細胞浸潤，腎間質寬度增加；B組7天可見腎小管擴張明顯，上皮細胞變性、水腫、甚至壞死，腎間質大量炎癥細胞浸潤，間質寬度明顯增加，偶見萎縮腎小管；B組14天上述病變加重，可見彌漫的腎小管基底膜增厚皺縮，小管基底膜不同程度斷裂，皮質及外髓萎縮的腎小管較多，間質中大量淋巴單核細胞浸潤，纖維化較明顯。Masson染色可見B組術后3天腎小管擴張，腎間質寬度增加，膠原纖維增加，染色加深；此后，

9、病變逐漸加重。C組與B組平行相比腎小管間質病變程度明顯減輕，腎間質相對面積明顯減少(P<0.05)。三組間比較均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。免疫組織化學結果顯示：①OPN在A組腎組織的亨利氏襻升支粗段、遠曲小管、集合管均有少量持續(xù)表達，而在腎小球內基本無表達。B組大鼠梗阻側腎小管-間質中OPN表達較A組明顯增加(P<0.05)且表達隨小管損傷范圍的增加及腎間質纖維化的加重呈明顯升高趨勢。OPN主要分布在腎小管上皮細胞胞漿及腎小管上皮刷

10、狀緣，部分間質細胞亦有表達。術后3天，B組大鼠腎組織表達量較A組有增加，且隨著梗阻時間延長升高程度更加明顯，至第14天表達最強。C組大鼠在術后各時間點腎小管-間質OPN表達均明顯低于B組，但仍高于A組(P<0.05、)。②CD44在腎小管上皮細胞表達。A組在整個過程中腎小管細胞只有低度表達。B組腎小管CD44表達第3d時開始上升，第14d升至高峰。C組腎組織各時間點CD44表達量較B組明顯減輕，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。③腎間質巨噬

11、細胞的浸潤：A組各時期偶可見到巨噬細胞的浸潤。B組術后第3天可見少量巨噬細胞浸潤，第7天可見多量巨噬細胞浸潤，第14天最多，均高于A組(P<0.05)。C組與A組同時期相比巨噬細胞均升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。C組與B組同時相相比巨噬細胞數(shù)有明顯減少，二者有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。相關分析：本研究顯示，腎小管CD44和OPN的陽性細胞數(shù)與小管間質內ED-1浸潤的細胞數(shù)有明顯的相關關系，呈正相關。結論：隨單側輸尿管結扎大鼠病情