基于納米多孔金片電極的電化學(xué)生物傳感器的研制及應(yīng)用.pdf

1、電化學(xué)生物傳感器集合了生物識(shí)別專一性、納米粒子的生物兼容性及放火性及電化學(xué)信號(hào)檢測(cè)的放大作用的優(yōu)勢(shì)，具有靈敏度高、選擇性好、易于微型化和自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，是現(xiàn)代生物分析的主要發(fā)展方向。
　　 本論文主要研制了基于納米多孔金片電極及納米粒子探針的新型電化學(xué)生物傳感器，并將此傳感器應(yīng)用在了C反應(yīng)蛋白、乙肝表血抗原、K562細(xì)胞以及K562細(xì)胞表面糖蛋白的檢測(cè)，靈敏度高，檢測(cè)限低，有利于超痕量蛋白的分析和疾病的早期檢測(cè)，建立了一種快速、簡(jiǎn)

2、便、可靠的分析方法；構(gòu)建了一種免光源的光電分析法，檢測(cè)游離谷胱甘肽和細(xì)胞內(nèi)游離巰基的含量，取得了較理想的結(jié)果。本論文的主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 1構(gòu)建了一種基于納米多孔金片電極以及HRP標(biāo)記CRP抗體修飾的納米金粒子復(fù)合物的高靈敏C反應(yīng)蛋白電化學(xué)免疫傳感器。在0.01 ng mL-1到0.5 ngmL-1的濃度范圍內(nèi)測(cè)定C反應(yīng)蛋白的工作曲線，檢測(cè)限為6.85 pg/mL。納米會(huì)粒子作為支撐材料大大增加了固定的HRP標(biāo)記的CRP抗

3、體的數(shù)量，提高了CRP免疫分析的檢測(cè)靈敏度。這種超靈敏的方法可以用最小體積的樣本檢測(cè)CRP，樣本的稀釋可以消除血清中其它蛋白的干擾以提高CRP免疫分析的選擇性。
　　 2本文構(gòu)建了一種基于納米多孔金片電極（NPG）以及辣根過(guò)氧化酶（HRP）標(biāo)記抗體修飾的納米金粒子的電化學(xué)酶聯(lián)免疫傳感器，運(yùn)用夾心式免疫分析法檢測(cè)血清乙肝表面抗原濃度。由于納米多孔會(huì)片電極的有效表面積比普通裸電極大得多，再加上納米金粒子的生物兼容性和放大作用，大大增

4、大了固定到電極表面的酶標(biāo)抗體的量，從而提高了目標(biāo)蛋白的檢測(cè)靈敏度。本文測(cè)定乙肝表面抗原（HBsAg），結(jié)果表明抗原濃度在0.01到1.0 ng/mL成線性關(guān)系，最低檢測(cè)限為2.3 pg/mL。使用這種新方法分析多個(gè)人體血清樣品的結(jié)果也與ELISA的結(jié)果吻合，并且這種方法與ELISA法相比還有直接、快速、簡(jiǎn)單以及比ELISA法分析靈敏度高出100倍等優(yōu)點(diǎn)，表明此方法可以精確、簡(jiǎn)單靈敏的檢測(cè)人體血清樣品中的乙肝表而抗原
　　 3構(gòu)建

5、了一種基于納米多空金片電極的細(xì)胞電化學(xué)傳感器，細(xì)胞通過(guò)表面糖基與刀豆球蛋白（Con A）的特異性識(shí)別固定到電極表面。固定了細(xì)胞的電極與糖蛋白抗體納米探針?lè)跤螅瑢dS納米粒子引入到細(xì)胞表面。細(xì)胞及細(xì)胞表面的糖蛋白（P-gp）的數(shù)量通過(guò)細(xì)胞表面的CdS納米粒了溶解下的鎘離子的電化學(xué)溶出分析定量。由于一個(gè)納米金粒了通過(guò)橋聯(lián)DNA可以接上百個(gè)CdS納米粒子，大大的提高了細(xì)胞的檢測(cè)靈敏度。以K562細(xì)胞為例，電化學(xué)信號(hào)與細(xì)胞濃度的對(duì)數(shù)成正比，

6、K562細(xì)胞的線性范圍是每毫升1×102到1.0×105個(gè)，表現(xiàn)出了很高的靈敏度。這種信號(hào)放大方法可以進(jìn)一步應(yīng)用于評(píng)價(jià)細(xì)胞膜表面的糖蛋白表達(dá)，經(jīng)過(guò)計(jì)算得出每一個(gè)K562細(xì)胞表面約有3.144×103個(gè)糖蛋白分子，經(jīng)過(guò)阿霉素處理的細(xì)胞膜上的P-糖蛋白是K562細(xì)胞膜糖蛋白表達(dá)的10倍。這種檢測(cè)方法為高靈敏細(xì)胞傳感器的發(fā)展提供了平臺(tái)以及開(kāi)辟了細(xì)胞表面糖蛋白表達(dá)評(píng)估的新方法。
　　 4首次構(gòu)建了一種免光源光電分析細(xì)胞內(nèi)巰基化合物的方法