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1、隨著現(xiàn)代電子及生物技術(shù)的迅速發(fā)展,生物傳感技術(shù)已形成一個(gè)獨(dú)立的新興高科技領(lǐng)域,它涉及到生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)、材料學(xué)、醫(yī)學(xué)以及電子技術(shù)等多學(xué)科交叉領(lǐng)域的多種技術(shù)。生物傳感器能夠?qū)⑸锊牧希ㄈ缑浮⒖贵w、核酸、微生物、組織、細(xì)胞器、細(xì)胞受體、代謝產(chǎn)物等)、生物衍生材料(如基因工程抗體、蛋白及核酸適配體等)或仿生物質(zhì)(如合成催化劑、組合配體和印跡聚合物等)與物理或化學(xué)型轉(zhuǎn)換器緊密結(jié)合,通過將待測(cè)的生物信號(hào)轉(zhuǎn)換成聲、光、電等可檢測(cè)的物理信號(hào)來實(shí)現(xiàn)
2、對(duì)樣本中靶生物分子的檢測(cè)。生物傳感器因其具有高效、靈敏、特異以及結(jié)構(gòu)小巧、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn),近年來在生命科學(xué)研究及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛的應(yīng)用。
作為生物傳感器的一個(gè)重要分支,電化學(xué)生物傳感器是以電化學(xué)傳感器作為基礎(chǔ)電極與生物活性材料組成的生物傳感器,簡(jiǎn)稱生物電極。它具有一些顯著的優(yōu)勢(shì),如設(shè)備簡(jiǎn)單、體型小、靈敏度高、選擇性好、操作簡(jiǎn)單、分析速度快、成本低廉,而且具有較高的靈活性。因此在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中,特別是即時(shí)檢驗(yàn)(Point of
3、Care Testing,POCT)中具有較好的應(yīng)用前景。
對(duì)于電化學(xué)傳感器而言,尋找合適的電極修飾材料對(duì)于提高其性能具有極其關(guān)鍵的作用。石墨烯材料是近些年出現(xiàn)的一種新型納米材料,其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和性能使其成為備受關(guān)注的電極修飾材料。目前用于電化學(xué)傳感的石墨烯材料大多是還原氧化石墨烯(Reduced Graphene Oxide,RGO),經(jīng)過還原后的氧化石墨烯不僅具有良好的導(dǎo)電性和大的比表面積,同時(shí)還含有部分結(jié)構(gòu)缺陷和少量功能化
4、官能團(tuán),可以作為一種理想的電極修飾材料。在眾多還原方法中,電化學(xué)還原GO制備還原氧化石墨烯(ERGO)是繼化學(xué)還原法后出現(xiàn)的一種新方法。相比于化學(xué)還原劑,電化學(xué)還原法是一種更快速、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、綠色無(wú)污染的還原方法。
本研究采用一步法電化學(xué)還原GO,制備了還原氧化石墨烯(ERGO)修飾的玻碳電極,并基于此實(shí)現(xiàn)了對(duì)DNA、多巴胺和蘆丁的電化學(xué)檢測(cè)。課題的主要內(nèi)容包括以下四個(gè)部分:
第一部分:電化學(xué)還原氧化石墨烯修飾電極的
5、制備及表征
利用電化學(xué)循環(huán)伏安一步沉積法將GO還原修飾至玻碳電極表面,得到ERGO/GCE,采用拉曼光譜法對(duì)修飾后的電極進(jìn)行了表征;以[Fe(CN)6]3-/4-為探針,采用循環(huán)伏安法(CV)考察了修飾電極的電化學(xué)性能。拉曼光譜的結(jié)果顯示,GO成功地被還原了。而且修飾后的玻碳電極在[Fe(CN)6]3-/4-中的氧化還原峰電流相比于裸電極增加了,說明ERGO修飾層能夠有效加速電極表面的電子傳遞。
第二部分:基于還原氧
6、化石墨烯的電化學(xué)DNA傳感器的研制
使用還原氧化石墨烯修飾電極(ERGO/GCE),利用連結(jié)劑1-芘丁酸-琥珀酰亞胺酯(PASE)共價(jià)固定肽核酸(PNA)探針,并以亞甲基藍(lán)(MB)作為雜交指示劑,研制了一種新型的電化學(xué)DNA傳感器。結(jié)果顯示,在1.0×10-12 mol/L~1.0×10-7mol/L范圍內(nèi),MB的還原峰電流與互補(bǔ)DNA濃度的對(duì)數(shù)值呈良好的線性關(guān)系,檢測(cè)限為5.45×10-13 mol/L。并且該傳感器能夠特異
7、性識(shí)別單堿基錯(cuò)配序列和完全非互補(bǔ)序列。表明該電化學(xué)DNA傳感器具有較高的靈敏度和特異性。
第三部分:基于還原氧化石墨烯構(gòu)建的電化學(xué)傳感器檢測(cè)多巴胺
將ERGO/GCE用于對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(DA)的檢測(cè)。結(jié)果顯示,DA在ERGO/GCE上的電化學(xué)響應(yīng)比裸電極明顯增強(qiáng),且在抗壞血酸(AA)和尿酸(UA)共存條件下能夠成功區(qū)分三種物質(zhì)的不同氧化峰??疾炝瞬煌琾H的緩沖溶液對(duì)DA電化學(xué)響應(yīng)的影響。在最優(yōu)條件下,將該傳感器用于
8、對(duì)DA的定量分析,結(jié)果顯示DA的氧化峰電流與其濃度在1.0×10-7 mol/L~1.0×10-5 mol/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
第四部分:基于還原氧化石墨烯構(gòu)建的電化學(xué)傳感器檢測(cè)蘆丁
將ERGO/GCE用于對(duì)中藥小分子蘆丁(Rutin)的檢測(cè)。結(jié)果顯示在ERGO/GCE上,蘆丁的氧化還原峰電流遠(yuǎn)比裸電極大,說明修飾石墨烯后,導(dǎo)電性增強(qiáng),加快了蘆丁氧化還原反應(yīng)過程中質(zhì)子交換的速度,從而使得電流信號(hào)增強(qiáng)。同時(shí)考
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