大腸癌中Annexin A1表達(dá)與K-ras基因突變的相關(guān)性分析.pdf

1、研究目的：
　　 大腸癌是結(jié)腸癌和直腸癌的總稱(chēng)，是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。近年來(lái)，建立在分子生物學(xué)基礎(chǔ)上的靶向治療，已經(jīng)取得了實(shí)質(zhì)性的療效，以表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)為靶點(diǎn)的單克隆抗體治療晚期大腸癌為標(biāo)志，預(yù)示著大腸癌進(jìn)入了分子靶向治療的新紀(jì)元。作為抗EGFR單抗的靶點(diǎn)，EGFR目前受到高度的關(guān)注。研究表明Annexin A1(簡(jiǎn)稱(chēng)ANXA1)起到抑癌基因作用，其可以調(diào)節(jié)EGFR的內(nèi)吞及降解，促進(jìn)凋亡，抑制腫瘤形成。本

2、研究通過(guò)檢測(cè)大腸癌組織中ANXA1在K-ras、BRAF基因野生型及K-ras、BRAF基因突變型大腸癌組織的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)水平，及相應(yīng)癌旁正常粘膜組織ANXA1的表達(dá)情況，分析不同組織中ANXA1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的異同，旨在探討ANXA1與大腸癌的臨床、病理及分子生物學(xué)特征的關(guān)系，分析ANXA1表達(dá)情況與K-ras及BRAF基因突變的相關(guān)性，為大腸癌的診斷、治療及預(yù)后判斷提供客觀(guān)的參考指標(biāo)。同時(shí)，探討ANXA1的表達(dá)水平是否可以替代K-ras

3、基因突變檢測(cè)，作為分子靶向藥物應(yīng)用于大腸癌臨床治療的參考指標(biāo)。
　　 研究方法：
　　 1、收集大腸癌及相應(yīng)癌旁正常粘膜組織，部分液氮保存，部分石蠟包埋。同時(shí)收集樣本臨床病理資料。
　　 2、抽提基因組DNA，通過(guò)基因測(cè)序方法檢測(cè)大腸癌的基因突變情況。
　　 3、應(yīng)用免疫組織化學(xué)、Real-time PCR及Western blot蛋白印跡等方法檢測(cè)ANXA1在K-ras、BRAF基因野生型及K-ras、

4、BRAF基因突變型大腸癌組織及對(duì)應(yīng)正常粘膜組織的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)水平，分析不同組中ANXA1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的異同。
　　 結(jié)果：
　　 1、在20例大腸癌標(biāo)本中，檢測(cè)出K-ras基因突變6例，突變率為30％，正常粘膜均未檢測(cè)出K-ras基因突變。然而在20例標(biāo)本及正常粘膜中均未檢測(cè)出BRAF突變。
　　 2、在K-ras基因野生型組，大腸癌組織中ANXA1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平較癌旁正常組織顯著下降，是癌旁正常組織的0

5、.122±0.057倍，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(單樣本t檢驗(yàn)，t=10.61，P＜0.001)，大腸癌組織中ANXA1蛋白的表達(dá)水平較癌旁正常組織顯著下降，是癌旁正常組織的0.729±0.034倍，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(單樣本t檢驗(yàn)，t=5.953，P＜0.001)；在K-ras基因突變型組，大腸癌組織中ANXA1 mRNA的表達(dá)水平顯著高于自身對(duì)照的癌旁正常組織，是癌旁正常組織的168.60±46.67倍，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(單樣本t

6、檢驗(yàn)，t=5.865，P＜0.01)，大腸癌組織中ANXA1蛋白的表達(dá)水平顯著高于自身對(duì)照的癌旁正常組織，是癌旁正常組織的1.854±0.216倍，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(單樣本t檢驗(yàn)，t=3.790，P＜0.05)。因此，在K-ras基因野生型大腸癌組織中ANXA1表達(dá)下調(diào)；而在K-ras基因突變型大腸癌組織中ANXA1表達(dá)上調(diào)；與K-ras基因野生型標(biāo)本相比，ANXA1在K-ras基因突變型標(biāo)本中無(wú)論在轉(zhuǎn)錄水平還是在蛋白表達(dá)水平都顯著

7、增加。
　　 3、大腸癌伴有K-ras基因突變者腫瘤的浸潤(rùn)深度較深，病理學(xué)分型較差，且出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的比例較高；在ANXA1表達(dá)上調(diào)的樣本中腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的比例明顯高于ANXA1表達(dá)下調(diào)的樣本(P＞0.05)。且在ANXA1表達(dá)上調(diào)的樣本中K-ras基因的突變率明顯高于ANXA1表達(dá)下調(diào)的樣本(P＜0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1、本研究首次闡述了ANXA1在大腸癌中的表達(dá)與K-ra

8、s基因突變的關(guān)系。數(shù)據(jù)顯示在K-ras基因野生型大腸癌樣本中，ANXA1表達(dá)下調(diào)；而在K-ras基因突變型大腸癌樣本中，ANXA1表達(dá)顯著上調(diào)。ANXA1的表達(dá)水平可能成為潛在的預(yù)測(cè)大腸癌基因型，替代K-ras基因突變檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)臨床篩查，指導(dǎo)臨床應(yīng)用分子靶向藥物的參考指標(biāo)，具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 2、研究中發(fā)現(xiàn)在ANXA1表達(dá)上調(diào)的樣本中腫瘤發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的比例高于ANXA1表達(dá)下調(diào)的樣本(P＞0.05)，且在

9、ANXA1表達(dá)上調(diào)的樣本中K-ras基因的突變率明顯高于ANXA1表達(dá)下調(diào)的樣本(P＜0.001)，提示在大腸癌中ANXA1表達(dá)上調(diào)可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)，ANXA1表達(dá)情況是否可能成為預(yù)測(cè)腫瘤預(yù)后的指標(biāo)還需進(jìn)一步論證。
　　 3、ANXA1對(duì)EGFR及下游Ras/Raf/MEK/ERK/MAPK細(xì)胞信號(hào)通路的調(diào)控作用是通過(guò)調(diào)節(jié)EGFR的內(nèi)吞及降解實(shí)現(xiàn)的。并且ERK/MAPK對(duì)EGFR具有負(fù)反饋?zhàn)饔?，ERK/MAPK通過(guò)負(fù)反饋?zhàn)饔?/p>