大腸癌中EGFR、Ras蛋白表達(dá)及K-ras基因突變的研究.pdf

1、背景與目的：大腸癌的發(fā)生與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的功能異常有關(guān)，其中的Ras/MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是細(xì)胞外信號由膜外受體通過一系列基因誘發(fā)細(xì)胞核內(nèi)反應(yīng)的重要通路，其上游的EGFR基因是一種跨膜糖蛋白，在多種腫瘤包括大腸癌中均存在高表達(dá)。處于EGFR下游的K-ras癌基因?yàn)榧?xì)胞外信號從EGFR傳至胞內(nèi)的中介，在大腸癌中被認(rèn)為是啟動癌變的關(guān)鍵基因之一，其主要以點(diǎn)突變的方式活化，且常見的突變位點(diǎn)位于第2外顯子第12、13密碼子中。大量研究表明，EG

2、FR、K-ras基因與大腸癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，但與大腸癌具體生物學(xué)行為間的關(guān)系的結(jié)論并不一致，且目前國內(nèi)外將兩者結(jié)合用于在大腸癌中的蛋白表達(dá)的研究尚未見報(bào)道。本研究通過檢測大腸癌、大腸腺瘤與癌旁黏膜中EGFR、Ras蛋白的表達(dá)情況，以及他們與臨床病理特征的關(guān)系，旨從蛋白水平探討兩基因在大腸癌發(fā)生中的作用。另外通過分析部分大腸癌組織中K-ras基因突變狀況及其與Ras蛋白表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)而從基因水平探討K-ras基因在大腸癌發(fā)病中的作用

3、機(jī)制。 方法：診斷明確的大腸癌手術(shù)切除標(biāo)本115例，其中43例取癌旁黏膜組織（距腫瘤邊緣≥5cm），另取內(nèi)鏡下切除大腸腺瘤標(biāo)本36例。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測EGFR、Ras蛋白在大腸癌、大腸腺瘤與癌旁黏膜組織中的表達(dá)，分析兩種蛋白表達(dá)與臨床病理間的關(guān)系；從115例大腸癌組織中隨機(jī)選取70例，用PCR擴(kuò)增-直接測序法檢測K-ras基因第2外顯子12、13密碼子突變，分析K-ras基因突變對Ras蛋白表達(dá)的影響及臨床意義。

4、 結(jié)果：1．EGFR蛋白陽性表達(dá)率在大腸癌、大腸腺瘤與癌旁黏膜組分別為62．61%（72/115）、30．56%（11/36）與12．77%（6/47），三者間有顯著性差異（P<0．05）； Ras蛋白陽性表達(dá)率在大腸癌、大腸腺瘤與癌旁黏膜組分別為46．09%（53/115）、38．89%（14/36）與10．63%（5/47），前兩者明顯高于后者（P<0．05）。 2．在大腸癌浸潤深度達(dá)黏膜下層和肌層、漿膜下層及侵透漿膜層組E

5、GFR蛋白陽性表達(dá)率分別為36．84%（7/19）、65．82%（52/79）與70．59%（12/17），后兩者明顯高于前者（P<0．05）。EGFR蛋白表達(dá)與大腸癌患者性別、年齡、腫瘤部位、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性（P>0．05）。 3．在低分化癌與高中分化癌組中Ras蛋白的陽性表達(dá)率分別為59．52%（25/42）與38．36%（28/73），兩者有顯著性差異（P<0．05）。Ras蛋白的表達(dá)與大腸癌

6、患者性別、年齡、腫瘤部位、浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性（P>0．05）。 4．大腸癌中EGFR、Ras蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0．354，P<0．05）。 5．選取的70例大腸癌中K-ras基因突變率為30%（21/70）；其中第12位密碼子突變占66．67%（14/21），突變位點(diǎn)均位于K-ras基因第12位密碼子第2位堿基上（G→T突變8例，G→A突變4例，G→C突變2例；G→T、G→A、G→C突變

7、率分別為38．10%，19．05%，9．52%）；第13位密碼子突變率為33．33%（7/21），突變位點(diǎn)位于K-ras基因第13位密碼子第1、2位堿基上（G→T突變4例，G→C突變2例，另一例有G→T和G→A兩種突變；G→T、G→A、G→C突變率分別為19．05%，4．76%，9．52%）。K-ras基因突變在男女性別組的陽性率分別為20．93%（9/43）與44．44%（12/27），兩者有顯著性差異（P<0．05）。K-ras基因

8、突變與大腸癌患者年齡、腫瘤部位、浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性（P>0．05）。 6．K-ras基因突變與Ras蛋白表達(dá)成正相關(guān)（r=0．237，P<0．05）。 結(jié)論：1．癌旁黏膜、大腸腺瘤與大腸癌中EGFR和Ras蛋白表達(dá)依次上調(diào)，提示兩者與大腸癌的發(fā)生有關(guān)。 2．大腸癌組織中EGFR蛋白的表達(dá)與腫瘤浸潤深度呈正相關(guān)。 3．大腸癌組織中Ras蛋白的表達(dá)與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)。