TLR3及其下游蛋白在缺糖缺氧誘導(dǎo)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：通過觀察Toll樣受體3(Toll-like receptor3，TLR3)及其下游蛋白在TLR3激動(dòng)劑poly(I：C)-LMW預(yù)處理后缺糖缺氧誘導(dǎo)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元的表達(dá)情況，探討TLR3信號通路在缺血性腦血管病發(fā)生后皮質(zhì)神經(jīng)元損傷中的作用機(jī)制。
　　方法：取體外培養(yǎng)7天的SD大鼠胎鼠原代皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞，建立體外缺糖缺氧細(xì)胞模型。分組如下：1)空白對照組：皮質(zhì)神經(jīng)元正常條件培養(yǎng)組；2)缺糖缺氧組(Oxygen-glucos

2、e deprivation，OGD組)：缺糖缺氧2小時(shí)，復(fù)糖復(fù)氧24小時(shí)；3)TLR3激動(dòng)劑poly(I：C)預(yù)處理組(激動(dòng)劑組)：TLR3激動(dòng)劑預(yù)處理8小時(shí)；4)TRL3激動(dòng)劑+OGD組：TLR3激動(dòng)劑預(yù)處理8小時(shí)后缺糖缺氧2小時(shí)，復(fù)糖復(fù)氧24小時(shí)。應(yīng)用免疫熒光技術(shù)觀察各組神經(jīng)元數(shù)目及形態(tài)變化。以Westernblot法測定TLR3、IRF-3、IFN-β蛋白表達(dá)情況，以RT-PCR法測定TLR3 mRNA、IRF-3 mRNA、IF

3、N-β mRNA的表達(dá)情況，應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：1.細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示：與空白對照組相比，OGD組、激動(dòng)劑+OGD組神經(jīng)元細(xì)胞狀態(tài)較差，數(shù)目較少(P<0.05)，激動(dòng)劑組與空白對照組相比，細(xì)胞狀態(tài)相似，數(shù)目無明顯差異(P>0.05)；與激動(dòng)劑組相比，OGD組、激動(dòng)劑+OGD組細(xì)胞狀態(tài)較差，數(shù)目較少(P<0.05)；與激動(dòng)劑+OGD組相比，OGD組細(xì)胞狀態(tài)較差，數(shù)目較少(P<0.05)。

4、　　2.Western blot結(jié)果顯示：與空白對照組相比，OGD組、激動(dòng)劑組、及激動(dòng)劑+OGD組TLR3表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；與激動(dòng)劑組相比，OGD組、激動(dòng)劑+OGD組TLR3表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；與激動(dòng)劑+OGD組相比，OGD組TLR3表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。與空白對照組相比，OGD組、激動(dòng)劑組、及激動(dòng)劑+OGD組IRF-3、IFN-β表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；與激動(dòng)劑組相比，OGD組、激動(dòng)劑+OGD組IRF-3、I

5、FN-β表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；與激動(dòng)劑+OGD組相比，OGD組IRF-3、IFN-β表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)。
　　3.RT-PCR結(jié)果顯示：與空白對照組相比，OGD組、激動(dòng)劑組、及激動(dòng)劑+OGD組TLR3 mRNA表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；與激動(dòng)劑組相比，OGD組、激動(dòng)劑+OGD組TLR3 mRNA表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；與激動(dòng)劑+OGD組相比，OGD組TLR3 mRNA表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。與空白對照組相比，O

6、GD組、激動(dòng)劑組、及激動(dòng)劑+OGD組IRF-3 mRNA、IFN-β mRNA表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；與激動(dòng)劑組相比，OGD組、激動(dòng)劑+OGD組IRF-3 mRNA、IFN-β mRNA表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)；與激動(dòng)劑+OGD組相比，OGD組IRF-3 mRNA、IFN-β mRNA表達(dá)增強(qiáng)(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.神經(jīng)元缺糖缺氧后TLR3及其下游IRF-3、IFN-β表達(dá)升高。提示TLR3可能通過MyD88非依賴通路