HIF-1α在缺糖缺氧誘導(dǎo)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元Necroptosis中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：研究低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)是否參與缺糖缺氧誘導(dǎo)的原代皮質(zhì)神經(jīng)元Necroptosis， necrostatin-1(Nec-1)對(duì)其表達(dá)是否有影響。
　　 方法：原代皮質(zhì)神經(jīng)元培養(yǎng)14天，予Casepase抑制劑z-VAD-FMK20μmol/L預(yù)保護(hù)，缺糖缺氧(OGD)2h、再灌注0、2、6、12、24、48h，進(jìn)行LDH測(cè)定RT-PCR測(cè)HIF-1α

2、RNA表達(dá)；免疫組化定性檢測(cè)HIF-1α表達(dá)情況；Western blot檢測(cè)總HIF-1α蛋白表達(dá)情況；分別提取細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核蛋白，Western blot分別檢測(cè)胞質(zhì)、胞核內(nèi)HIF-1α蛋白表達(dá)情況。予不同濃度Nec-1(0.1、1、5、10、25、50μmol/L)，原代皮質(zhì)神經(jīng)元OGD后檢測(cè)LDH, RT-PCR和Western blot測(cè)HIF-1αRNA和蛋亡1表達(dá)。予YC-1(4μ mol/L)預(yù)作用30min, OGD2

3、h再灌注12h檢測(cè)HIF-1α蛋白表達(dá)水平及LDH水平。
　　 結(jié)果：Casepase抑制劑z-VAD-FMK(20μmol/L)預(yù)作用30min，缺糖缺氧2h后培養(yǎng)基中LDH增加（P＜0.05），再灌注12h達(dá)高峰；缺糖缺氧后HIF-1αRNA表達(dá)無變化（P＞0.05）；免疫組化檢測(cè)顯示細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均有蛋白表達(dá)；HIF-1α總蛋白表達(dá)增加(P＜0.05)，再灌注12h達(dá)高峰；神經(jīng)元OGD2h、再灌注6h時(shí)細(xì)胞質(zhì)HIF-1α

4、蛋白表達(dá)達(dá)高峰(P＜0.05)，隨后降低；再灌注12h時(shí)，細(xì)胞核HIF-1α蛋白表達(dá)達(dá)高峰(P＜0.05)，隨后降低。Nec-15μmol/L時(shí)LDH明顯降低（P＜0.05），25umol/L時(shí)與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。予Nec-125μmol/L時(shí)HIF-1α蛋白明顯減少（P＜0.05），RNA無明顯變化。予YC-1(4μ mol/L)作用后HIF-1α蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.05), LDH水平明顯降低(P＜0