γ-射線輻照濃縮血小板研究初探.pdf

1、研究背景和目的：經(jīng)血液制品傳播的病毒主要有HBV、HCV、HIV-1/2，此外還有HTLV-1/2、HDV、HEV、巨細(xì)胞病毒和微小病毒B19等。目前，我國(guó)雖對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行ALT、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和梅毒篩查，有效地控制了輸血傳播疾病的傳播。但由于檢測(cè)水平的限制，檢測(cè)技術(shù)固有的窗口期問(wèn)題，以及新病毒及變異株的不斷出現(xiàn)，依然存在發(fā)生輸血傳播疾病的危險(xiǎn)。所以，對(duì)血液制品潛在的病毒進(jìn)行有效地滅活，就是保證血液安全的重要措施。大量

2、的實(shí)驗(yàn)證實(shí)γ-射線輻照對(duì)各種微生物均有殺滅作用，包括有包膜和無(wú)包膜的病毒及所有的基因型物質(zhì)。目前，應(yīng)用γ-射線對(duì)血液進(jìn)行輻照主要預(yù)防輸血相關(guān)移植物抗宿主?。═A-GVHD）。γ-射線輻照預(yù)防移植物抗宿主病的原理是利用放射性同位素衰變中產(chǎn)生γ-射線穿透有核細(xì)胞，直接使細(xì)胞核的DNA產(chǎn)生不可逆的損傷并干預(yù)其正常的修復(fù)過(guò)程，造成淋巴細(xì)胞喪失有絲分裂的活性和停止增殖。輻照的效果與輻照的劑量直接相關(guān)。 根據(jù)γ-射線輻照預(yù)防移植物抗宿主病及

3、γ-射線可以病毒滅活的理論，我們開(kāi)展γ-射線輻照血小板病毒滅活的研究。在預(yù)防移植物抗宿主病劑量的基礎(chǔ)上加大輻照劑量至足以使滅活病毒，同時(shí)保證血小板的保存質(zhì)量、功能沒(méi)有顯著性影響，這是本課題研究的主要內(nèi)容。 方法：本實(shí)驗(yàn)主要為γ-射線輻照血小板病毒滅活研究的前期工作，主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容有： 一、血小板上清中乳酸測(cè)定方法的建立。原理：乳酸在乳酸脫氫酶作用下脫氫生成丙酮酸，同時(shí)NAD+接受H+生成NADH，根據(jù)NADH在340nm處

4、的吸光度變化來(lái)計(jì)算血小板上清中乳酸的含量。 二、評(píng)價(jià)血小板保存期間質(zhì)量指標(biāo)的選取和血小板保存損傷的研究。主要選取了代謝指標(biāo)，有pH值、上清中葡萄糖、乳酸、三磷酸腺苷、乳酸脫氫酶、乳酸脫氫酶溢出率。對(duì)八份血小板分別在保存的第一天、第三天、和第五天對(duì)其代謝指標(biāo)進(jìn)行觀察和評(píng)價(jià)。 三、γ-射線輻照對(duì)濃縮血小板保存期間質(zhì)量的影響：取三份血小板每份等分為十份后，一份作對(duì)照，其余分別接受35GY、70GY、105GY、140GY、17

5、5GY、210GY、245GY、280GY、315GY的劑量輻照，在輻照后即刻、24小時(shí)、保存期末分別檢測(cè)每袋血小板LDH溢出率，繪制劑量-LDH溢出率關(guān)系曲線，觀察其變化趨勢(shì)。取一袋分若干份冰凍保存，觀察冰凍時(shí)間-LDH溢出率關(guān)系曲線，與輻照組對(duì)比。取八袋血小板，每袋均分于為五份，分別為對(duì)照組、175GY劑量組、210GY劑量組、245GY劑量組、280GY劑量組。分別在輻照后即刻、保存期末檢測(cè)LDH溢出率，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析。取八袋

6、血小板每袋均分為兩份，分別為對(duì)照組、245GY劑量組檢測(cè)各種指標(biāo)，分析輻照組與對(duì)照組的區(qū)別。 結(jié)果： 一、建立了多點(diǎn)定標(biāo)檢測(cè)血小板上清中乳酸的方法，為測(cè)定血小板上清中的乳酸奠定了基礎(chǔ)。 二、血小板保存過(guò)程中，葡萄糖逐漸被消耗，乳酸逐漸產(chǎn)生，pH逐漸下降，ATP被利用，LDH溢出率也逐漸增大。 三、輻照后即刻、24小時(shí)各劑量組的LDH溢出率沒(méi)有變化趨勢(shì)，保存期末隨劑量的增大LDH溢出率也增大，175GY劑量