新型血小板添加液對(duì)血小板低溫液態(tài)保存效果的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、血小板是止血機(jī)制中一個(gè)重要因素，具有維護(hù)血管壁完整性的功能。輸注血小板已經(jīng)成為臨床預(yù)防和治療出血，改善各種原因引起的血小板減少、功能障礙的重要手段。因此，保證足夠的血小板貯存和供應(yīng)顯得尤為重要。目前血小板尚無有效的替代品，只能從無償獻(xiàn)血者體內(nèi)采集。目前臨床常規(guī)應(yīng)用的常溫(20-24℃)振蕩保存方式較有利于保持血小板的功能、體內(nèi)存活時(shí)間及回收率。然而，這種保存方式易受細(xì)菌污染，保存期僅有5天，難以滿足臨床對(duì)血小板制劑的大量需求；冰凍保存血

2、小板制劑常用低溫保護(hù)劑二甲基亞砜(DMSO)，對(duì)受者有毒副作用，且在冷凍和洗滌去除的過程中極易引起血小板的活化損傷，導(dǎo)致輸注后在受者體內(nèi)的回收率降低和壽命縮短。低溫(4℃)保存血小板雖可延長(zhǎng)保存時(shí)間，但低溫易使血小板激活，導(dǎo)致血小板膜損傷，引起血小板輸注后體內(nèi)快速清除，使血小板輸注效果降低。并且血漿中含有多種細(xì)胞因子如TGF-β、IL-1β和IL-8等，可引起相關(guān)的輸血不良反應(yīng)。因此，提高血小板制劑的體外保存質(zhì)量、延長(zhǎng)保存時(shí)間成為輸血醫(yī)

3、學(xué)研究的熱點(diǎn)。與傳統(tǒng)血漿保存的濃縮血小板(PCs)相比，血小板添加液(PAS)保存的PCs減少了血漿含量，從而降低過敏和發(fā)熱性輸血反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率，也減少了細(xì)菌污染的危險(xiǎn)，適合ABO血型不相合的血小板輸注，同時(shí)也可以獲得更多的血漿用于其他治療。海藻糖作為一種常用的低溫保存劑，廣泛應(yīng)用于低溫生物學(xué)領(lǐng)域和各種細(xì)胞保存。本課題基于對(duì)常規(guī)血小板添加劑進(jìn)行改良，并加入海藻糖，期望在較低溫度(10℃)時(shí)起到對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用，同時(shí)又克服低溫(4℃)時(shí)造

4、成血小板損傷的缺陷，達(dá)到延長(zhǎng)血小板的保存時(shí)間和提高血小板保存質(zhì)量的效果。 目的:從體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩方面探討使用改良的血小板添加液替代70％自體血漿在低溫(10℃)液態(tài)條件下對(duì)血小板的保存效果。 方法: 體外實(shí)驗(yàn)：采集6單位單采血小板，每一單位單采血小板平均分為3組，A組(血漿常溫組)加入100％血漿22℃保存；B組(添加液低溫組)加入70％PAS-ⅢM/30％血漿10℃保存；C組(冰凍組)加入100％血漿和海

5、藻糖-85℃保存；另設(shè)血漿低溫組加入100％血漿4℃保存，做為掃描電鏡對(duì)照組；A、B組在第1、5、7、9天取樣檢測(cè)，C組在20d后復(fù)蘇取樣檢測(cè)。分別檢測(cè)PLT計(jì)數(shù)、PDW、MPV、CD62p、HSR、PAgT、pH值、LDH以及GLU的變化。血漿常溫組、添加液低溫組于保存后第3、9天取樣掃描電鏡觀察，血漿低溫組于保存后第3天取樣觀察，冰凍組在20天后復(fù)蘇取樣觀察，同時(shí)使用新鮮血小板制樣觀察作為對(duì)照。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：采集兔心臟血，按常

6、規(guī)方法制備濃縮血小板，并將濃縮血小板分三組保存。血漿常溫組為添加100％血漿22℃保存；添加液低溫組為添加70％PAS-ⅢM/30％血漿10℃保存；冰凍組為添加100％血漿-85℃保存；制備豚鼠抗兔血小板血清并建立兔血小板缺乏癥模型后以新鮮血小板為對(duì)照，常溫血漿保存組在第3天，添加液低溫保存組在第3、7、9天，冰凍保存組在第20天復(fù)蘇后分別檢測(cè)兔血小板缺乏癥模型的血小板24h回收率和生存率。 結(jié)果:保存期內(nèi)隨保存時(shí)間延長(zhǎng)，A組和

7、B組CD62p表達(dá)增加，HSR和最大聚集率降低；A組的LDH釋放、GLU消耗、CD62p表達(dá)、血小板最大聚集率均顯著高于B組而HSR低于B組(P＜0.05)。A組pH在第5天起明顯降低(P＜0.05)。C組LDH釋放明顯較其他兩組增多，但CD62p表達(dá)較少(P＜0.05)。C組PDW顯著升高(P＜0.05)，除與B組第5天結(jié)果相似外，均高于A、B組各時(shí)間點(diǎn)結(jié)果(P＜0.05)。各組PLT計(jì)數(shù)相差不顯著。掃描電鏡觀察4℃保存3天的血小板多

8、發(fā)生破裂，立體感弱，血小板絕大部分已發(fā)生聚集融合，形成粘性變形血小板。血漿常溫組、添加液低溫組血小板在3天時(shí)可見血小板立體感強(qiáng)，細(xì)長(zhǎng)偽足樣突起增多，形成樹突型血小板，粘性變形血小板少見，冰凍組血小板大部分形態(tài)改變，立體感減弱，血小板互相之間多發(fā)生聚集融合，形成粘性變形血小板。血漿常溫組、添加液低溫組血小板保存至9天，可見血小板有半數(shù)以上細(xì)胞發(fā)生融合，部分血小板破裂；添加液低溫(10℃)組血小板可見明顯絲狀突起，部分形成粘性變形血小板。

9、 除保存9天的添加液低溫組血小板存活率明顯低于新鮮血小板存活率(P＜0.05)外，血漿常溫組、添加液低溫組以及新鮮血小板的24h回收率和存活率相互比較均無顯著差異(P＞0.05)。冰凍保存組血小板24h回收率和存活率均低于其他各組(P＜0.05)。 結(jié)論：改良的PAS-ⅢM能夠替代血漿用于血小板制劑的保存，同時(shí)在低溫(10℃)條件下能夠很好地保護(hù)血小板的功能，抑制血小板的體內(nèi)快速清除，延長(zhǎng)血小板的保存時(shí)間，保存效果好于血漿