血小板生成素對膿毒癥血小板減少小鼠的作用研究.pdf

1、目的：
　　 膿毒癥相關(guān)性血小板減少在危重病急救醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有較高的發(fā)病率和死亡率，威脅人類健康，目前，臨床治療上仍未取得突破性進展。血小板生成素(thrombopoietin，TPO)作為巨核細胞和血小板生成的特異性因子，已被成功應(yīng)用于實體瘤和白血病化療后所致的血小板減少癥以及特發(fā)性血小板減少性紫癜等患者的治療中，雖有報道TPO對膿毒癥血小板減少的患者有效，但關(guān)于TPO對膿毒癥相關(guān)性血小板減少的影響有待研究。基于此基礎(chǔ)上，本項目以

2、小鼠為研究對象，腹腔注射大腸桿菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)制備膿毒癥相關(guān)性血小板減少模型，觀察各組小鼠血小板計數(shù)、骨髓增殖、炎癥免疫及死亡率情況，以及不同劑量TPO對上述相關(guān)指標的影響，旨在觀察TPO對膿毒癥血小板減少小鼠的保護作用，并探討其可能的機制，為臨床提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 本研究采用SPF級C57/BL6小鼠100只，均為雄性，體重在18-21g，隨機分為5組，分別為:正

3、常對照組（C組）（注射同等劑量生理鹽水）、模型組(LPS組)(腹腔注射LPS30mg/kg)、低劑量TPO治療組（L組）(腹腔注射LPS30mg/kg+每日皮下注射TPO4.5ug/kg)、中劑量TPO治療組（M組）(腹腔注射LPS30mg/kg+每日皮下注射TPO9ug/kg)、高劑量TPO治療組（H組）(腹腔注射LPS30mg/kg+每日皮下注射TPO18ug/kg)，其中TPO連續(xù)注射3天，觀察每日小鼠外周血血小板計數(shù)的變化，于第

4、4d處死小鼠，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法測定血漿TNF-α、IL-6、IL-10等炎性因子水平，無菌條件下取骨髓采用流式細胞術(shù)測定巨核細胞CD41/CD61、造血干細胞CD34+表達，取肺組織做石蠟切片HE染色，光學(xué)顯微鏡鏡下觀察組織病理改變，取胸腺、脾臟等臟器稱重并計算臟器指數(shù)，觀察各組小鼠72h死亡率。
　　 結(jié)果：
　　 1.LPS組小鼠注射LPS后血小板開始下降，1-4d血小板為C組的15-40％(P＜0

5、.01);1-2d時，L組小鼠血小板較M組、H組、LPS組相比較無明顯變化(P＞0.05);3-4d時，L組小鼠血小板明顯高于M組、H組及LPS組(P＜0.01)，M組、H組較LPS組則無升高(P＞0.05);L組、M組、H組及LPS組血小板最低值(×109/L)分別為259.4±51.3、169.4±62.4、137.0±39.8、128.2±31.1，L組小鼠血小板最低值高于M組、H組及LPS組(P＜0.05)，M組、H組較LPS組

6、無明顯升高(P＞0.05)。4d時LPS組小鼠骨髓巨核細胞CD41/CD61較正常組高(P＜0.05），L組小鼠骨髓巨核細胞CD41/CD61明顯高于M組、H組、LPS組及C組(P＜0.01)，M組、H組較C組升高(P＜0.05），較LPS組無升高(P＞0.05);4d時LPS組CD34+較C組無變化(P＞0.05），L組較M組、H組、LPS組及C組增多(P＜0.05)，M組、H組較LPS組及C組均無增多(P＞0.05)。
　　

7、 2.4d時LPS組小鼠4d時TNF-a、IL-6水平較C組無變化(P＞0.05），L組、M組、H組分別較LPS組及C組均無明顯改變(P＞0.05);4d時LPS組IL-10水平較C組無變化(P＞0.05），L組小鼠IL-10水平明顯高于M組、H組、LPS組及C組(P＜0.01)，M組、H組較LPS組及C組無明顯變化（P＞0.05）。4d時LPS組胸腺指數(shù)、脾指數(shù)較C組降低(P＜0.01)，L組較LPS升高(P＜0.01)，并恢復(fù)至C組

8、水平（P＞0.05），M組、H組較C組降低(P＜0.01)，較LPS組無升高(P＞0.05)。LPS組肺組織嚴重受損，L組的肺組織病變范圍、程度均較M組、H組、LPS組明顯減輕;M、H組病變較LPS組無明顯改善。
　　 3.LPS組、L組、M組、H組小鼠72h死亡率分別為65％、35％，60％、60％，L組明顯低于其它三組(P＜0.01)，M組、H組較LPS組無明顯改善(P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.

9、LPS誘導(dǎo)的膿毒癥血小板減少小鼠血小板嚴重下降，低劑量TPO可促進骨髓增殖，升高其血小板水平，提高血小板最低值，中、高劑量TPO則效果不明顯;
　　 2.LPS可致小鼠免疫力下降，肺組織嚴重受損，低劑量TPO可增加膿毒癥血小板減少小鼠的免疫，升高抗炎因子水平，并從一定程度上改善肺組織炎癥病變，降低72h死亡率，中、高劑量效果不明顯;
　　 3.低劑量TPO對LPS誘導(dǎo)的膿毒癥血小板小鼠具有保護作用，可能與其升高血小板、提