濃縮血小板復(fù)合功能紗布的研制.pdf

1、近年來，國內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)血小板除具有止血作用外，在創(chuàng)傷修復(fù)和再生領(lǐng)域也發(fā)揮著重要的作用。富血小板血漿(Platelet-rich Plasma，PRP)作為血小板的常規(guī)應(yīng)用形式，因其富含高濃度的復(fù)合生長因子和細胞因子等生物活性分子，廣泛用于組織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。但是PRP的主要形式是以液體存在，單獨運用有一定局限性，通過將其負載在生物材料上，可以更好的應(yīng)用在創(chuàng)面發(fā)揮止血愈創(chuàng)作用。
　　羧甲基殼聚糖是殼聚糖經(jīng)羧甲基化后的衍生物，

2、因為其良好的水溶性，規(guī)避了殼聚糖用稀酸作為溶劑的弊端，此外，其分子中含有羥基和氨基，可與多種功能活性物質(zhì)結(jié)合，充當其載體，從而使其得到廣泛的應(yīng)用和深入的研究。PRP是否能與其聯(lián)合應(yīng)用，國內(nèi)尚未見報道。本研究將從以下幾個方面研究負載濃縮血小板紗布的制備工藝并對其進行初步功能評價。
　　本研究中，我們以臨床上常用的可吸收性止血紗布為基礎(chǔ)，篩選出合適的原料為殼聚糖類，出于溶解性和降解周期的考慮，我們不用殼聚糖而選擇將羧甲基殼聚糖作為本課

3、題制備功能性紗布的原材料，然后將其與富血小板血漿復(fù)合，設(shè)計不同梯度的濃度、溫度及混合比例等條件，對該負載濃縮血小板的可吸收性紗布的制備條件進行探究。為證明其有效性，本研究進一步從促細胞增殖、動物急性創(chuàng)傷修復(fù)和外傷止血等幾個層面對其功能進行評價。
　　一.復(fù)合紗布制備材料的篩選
　　以臨床上常用的可吸收性止血紗布為基礎(chǔ)，選取臨床上常用的幾種代表性的紗布。制備濃縮血小板，并對其進行凍干前的預(yù)處理。然后在各組紗布的表面滴加制備好的

4、濃縮血小板，并經(jīng)過預(yù)凍、凍干等程序。然后對凍干后的材料進行復(fù)溶，測量其pH值并加入相應(yīng)的激活劑，觀察凝膠的的形成情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組復(fù)合凍干品質(zhì)地均呈現(xiàn)硬而脆，且只有殼聚糖類的復(fù)合凍干品能夠形成血小板凝膠，其余材料均呈現(xiàn)不同程度的酸性，未見凝膠形成。
　　二.羧甲基殼聚糖/濃縮血小板復(fù)合凍干品制備條件的探究
　　設(shè)計不同殼聚糖濃度、預(yù)凍溫度和CC/PRP共混比例等條件，制備CC/PRP復(fù)合凍干品，并對其進行肉眼觀和掃描電鏡觀

5、察，抗壓縮性能及所負載生長因子含量等進行測試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2-3％的殼聚糖溶液濃度，預(yù)凍溫度為-80℃，CC/PRP按1∶1共混比例混合時，所制備出的復(fù)合凍干品具有較好的抗壓縮性能，且負載的生長因子含量較高。
　　三.CC/PRP可吸收復(fù)合材料對HUVEC促增殖功能的研究
　　將不同CC、PRP共混比例制備的新型可吸收性復(fù)合血小板功能材料用基礎(chǔ)培養(yǎng)基浸提48h后，用凝血酶-葡萄酸鈣溶液激活，用其浸提上清作用于HUVEC，檢測復(fù)

6、合功能材料對HUVEC的促增值效果。研究發(fā)現(xiàn)，不同共混比例的復(fù)合功能材料均具有促進細胞增殖效果，且相同條件下，2％(wt/vol)濃度CC共混的復(fù)合材料，促增殖效果更好。
　　四.CC/PRP可吸收復(fù)合材料促進小鼠皮膚全層缺損模型的研究
　　前面的研究，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)復(fù)合止血紗布上已經(jīng)成功負載了較高濃度的生長因子，并且具有促進細胞增殖的作用。為進一步證明其促進創(chuàng)面修復(fù)的能力，通過建立小鼠皮膚全層缺損模型，將48只小鼠隨機分為4

7、組（空白組、CC/PRP組、CC組和FDP組），觀察其促創(chuàng)面修復(fù)效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗早期，CC/PRP組、CC組、FDP組均具有較高的促進創(chuàng)面愈合率，均明顯高于空白對照組。病理切片檢查提示，制備的復(fù)合材料具有縮短創(chuàng)傷炎癥期，加速傷口上皮化和創(chuàng)面愈合率、促進血管新生和膠原纖維的沉積與成熟等。由此可見，其具有明顯的促進創(chuàng)面愈合的作用。
　　五.CC/PRP可吸收復(fù)合材料對新西蘭白兔耳動脈出血的止血作用研究
　　32只新西蘭白兔隨

8、機分為4組（空白組、CC/PRP組、CC組和FDP組），建立了新西蘭白兔耳動脈出血模型，觀察所制備的復(fù)合CC/PRP對外傷性動脈出血的止血作用，并與FDP、CC進行比較。結(jié)果表明，CC/PRP、CC、FDP均具有一定的止血作用，且與單獨使用CC、FDP相比，兩者聯(lián)合制備的CC/PRP具有更顯著的止血效果。
　　綜上所述，本研究制備的CC/PRP可吸收復(fù)合功能性紗布，成功負載了生物活性分子，具有促進止血和創(chuàng)傷愈合作用，有望作為一種新