基于Ii分子的HCV-NS3 Th1表位基因疫苗的設計及功能研究.pdf

1、丙型病毒性肝炎是嚴重危害人類健康的傳染病。全球丙肝病毒(HCV)的感染人數(shù)約為一億七千萬，占世界人口總數(shù)的1-3％。在感染的人群中，約80％轉為慢性，20％發(fā)展為肝硬化和肝細胞癌；我國的HCV感染者占人口總數(shù)的3.2％，估計感染者總數(shù)約為4000萬。 自從1989年HCVcDNA首次被克隆成功至今，對HCV的分子生物學研究取得了突飛猛進的發(fā)展。目前已明確，HCV為單股正鏈RNA病毒，屬黃病毒科，全長約9600個核苷酸，ORF區(qū)編

2、碼3010個氨基酸的多聚蛋白前體，經過宿主和病毒本身基因編碼的蛋白酶裂解為十個功能性片段，其中四個為結構蛋白，分別是核心蛋白C、包膜蛋白E1、E2以及P7；六個為非結構蛋白，分別是NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。盡管HCV的基本結構已經清楚，但是HCV的防治仍然是世界性的難題，α干擾素和病毒唑聯(lián)合治療是唯一的治療方法，但這種治療方法只對不到50％的患者顯效，且具有費用高、易復發(fā)和副作用多等缺陷；尤其是我國流行的H

3、CV-Ⅱ/1b型，對α干擾素的治療應答最低，因此發(fā)展治療和預防性丙肝疫苗，對于預防HCV感染和控制感染者的病情發(fā)展，都具有重要的意義。 HCVNS3蛋白具有絲氨酸蛋白酶和解旋酶活性，參與病毒蛋白翻譯后加工，為病毒復制所必須，針對NS3蛋白的T細胞應答與自限性感染關系密切。目前公認位于NS3區(qū)的1248-1261位氨基酸殘基為CD4+Th1細胞表位，而且該表位對于MHC限制性具有廣譜特異性。本研究以BALB/c小鼠為實驗動物模型，

4、以MHCⅡ抗原提呈通路中的分子伴侶Ii鏈為載體，用HCV-NS3的1248-1261表位替換Ii鏈的CLIP編碼片段構建了內源性靶向基因疫苗，同時克隆了BALB/c小鼠的抗原提呈分子I-Adαβ鏈分子的編碼基因，在細胞水平研究了所構建的基因疫苗與抗原提呈分子之間的相互作用，并用構建的基因疫苗免疫BALB/c小鼠，研究了免疫小鼠的體液免疫和細胞免疫應答，在細胞水平和體內免疫研究的基礎上，為了對疫苗的有效性作出初步的評價，用穩(wěn)定轉染HCV-

5、NS3的BALB/c小鼠SP2/0細胞構建了荷瘤小鼠模型，用所構建的疫苗對荷瘤小鼠進行了免疫治療，結果表明：1內源性靶向基因疫苗在真核細胞合成后，HCV-NS3Th1表位能夠與MHC-Ⅱ抗原提呈分子結合，形成抗原表位/MHCⅡ分子復合體。 2形成的抗原表位/MHCⅡ分子復合體能夠到達細胞表面。 3BALB/c小鼠免疫的結果顯示，內源性靶向基因疫苗主要刺激小鼠產生Th1類型的細胞免疫；而非靶向對照疫苗主要刺激小鼠產生的是T

6、h2類型的細胞免疫。 4對HCV-NS3荷瘤小鼠的免疫治療顯示，內源性靶向基因疫苗在抑制腫瘤生成、限制腫瘤生長、延長成瘤小鼠的生存時間等方面優(yōu)于非靶向對照疫苗。綜上所述，本研究在國內外首次以Ii鏈作為載體構建了針對HCV-NS3的Th1表位內源性靶向基因疫苗，細胞水平和體內水平以及初步療效的研究結果都表明，以Ii鏈作為載體誘導機體產生Th1類型細胞免疫是可行的，這種方法有望為HCV的防治提供一種可行的途徑，在治療性HCV基因疫苗