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1、該研究首先從HCV基因組中擴增出ns5b基因,構(gòu)建了ns5b基因與報告分子EGFP(增強型綠色熒光蛋白)基因的融合基因真核表達質(zhì)粒pEGFPN3-ns5b;通過含有不同G418濃度梯度的培養(yǎng)液培養(yǎng)HepG2細胞,確定了篩選用G418工作濃度為800μg/ml;利用脂質(zhì)體法將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細胞,經(jīng)過有限稀釋法和G418壓力選擇,應用熒光顯微鏡和RT-PCR檢測,獲得可穩(wěn)定表達NS5B-EGFP融合蛋白的HepG2細胞克隆.然后根
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