H5N1-NS1基因的融合表達(dá)及RNAi技術(shù)抑制BmNPV增殖的研究.pdf

1、禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類感染的疾病綜合癥，是危害目前養(yǎng)禽業(yè)最嚴(yán)重的疫病之一。已有研究表明H5N1-NS1蛋白可以作為診斷試劑來鑒別診斷免疫動物和自然感染動物，因而開展NS1蛋白的研究在禽流感防治方面具有較高的應(yīng)用價值。 本研究將人工合成的H5N1-NS1基因克隆進(jìn)原核表達(dá)載體pET-28a(+)中，在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá)，結(jié)果表明：大腸桿菌中表達(dá)的重組蛋白分子量為31 kD，與理論值相符，此外還有一條分子量為1

2、5 kD左右的特異性條帶，推測與大腸桿菌密碼子的偏愛性或表達(dá)產(chǎn)物降解有關(guān)；同時將H5N1．NSl基因克隆進(jìn)桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBacHT A中，通過Bae toBae系統(tǒng)在Sf-9細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)的重組蛋白為33 kD，比預(yù)測的融合蛋白分子量30.5 kD略大，推測與表達(dá)產(chǎn)物的后加工有關(guān)。 開展了基于DNA載體的RNAi抑制家蠶核多角體病毒(BmNPV)復(fù)制的研究。用人工合成“A3 promoter-Sence lef