基因槍接種HBsDNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答的機理及促進其向Th1型轉(zhuǎn)換的研究.pdf

1、該課題以乙肝表面抗原(HBsAg)為靶抗原,對基因槍皮膚接種HBs DNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答的機理進行探討,并試圖尋找能促使其向Th1型轉(zhuǎn)換的佐劑策略.DNA疫苗以基因槍和注射器接種可能在以下幾方面存在差異,包括接種劑量、質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染機制、局部抗原遞呈細胞(APC)的種類、抗原加工呈遞的過程等.鑒于APC(特別是樹突狀細胞)的活化對免疫應(yīng)答的誘生及性質(zhì)有重要影響,推測基因槍與注射器接種對APC產(chǎn)生不同"危險信號"(在基因槍由金

2、顆粒轟擊造成,在注射器接種則為質(zhì)粒DNA中所含的CpG motif)可能是誘生不同類型免疫應(yīng)答的關(guān)鍵.為驗證此"危險信號"假說,該研究首先對基因槍皮膚接種與注射器肌注接種后BALB/c小鼠的局部組織作H&E染色觀察,結(jié)果表明基因槍接種轟擊金顆粒與注射器肌注接種CpG motif均可在局部誘發(fā)炎癥,證實二者均為可激活機體天然免疫反應(yīng)的"危險刺激".為探討兩種"危險刺激"對免疫應(yīng)答類型影響的可能機制,對BALB/c小鼠分別以基因槍皮膚接種質(zhì)

3、粒DNA+金顆粒、單獨金顆?；駽pG-ODN+金顆粒,注射器肌注接種質(zhì)粒DNA、CpG-ODN或GC-ODN,接種3小時、6小時、12小時、24小時與48小時后分離引流淋巴結(jié)細胞,體外培養(yǎng)加ConA刺激,進而以RT Real-Time PCR方法檢測各組細胞釋放IFN-γ、IL-12、IL-10或IL-4的水平.為克服基因槍接種DNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答為主的缺點,該研究進一步對可能促使基因槍接種HBs DNA疫苗誘生的Th2型免疫

4、應(yīng)答向Th1型轉(zhuǎn)換的佐劑策略進行了探討.已知CpG motif能激活TLR9信號通路而促進Th1型免疫,基于用基因槍轟擊金顆粒+CpG-ODN能使引流淋巴結(jié)細胞因子微環(huán)境轉(zhuǎn)化為Th1型的結(jié)果(該研究第一部分),推測在基因槍接種HBs DNA疫苗的同時共導(dǎo)入一定量的CpG-ODN有可能克服其Th2型的偏性.根據(jù)單鏈RNA能激活TLR7或TLR8信號通路而促進Th1型免疫以及HBcAg誘生Th1型免疫應(yīng)答的能力與其C末端結(jié)合RNA的性能有關(guān)

5、的研究報道,該研究進一步對HBcAg結(jié)合RNA的特性作為一種Th1佐劑策略的可能性進行了分析.通過上述研究,該文驗證了基因槍轟擊金顆粒可造成一種Th2偏性"危險性號"的假設(shè),并證實提高CpG moitif數(shù)量可使其向Th1型轉(zhuǎn)換,部分解釋了基因槍接種HBs DNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答的機制,并為應(yīng)用CpG motif促使其向Th1型轉(zhuǎn)換提供了實驗依據(jù);提出并用實驗證明在基因槍接種HBs DNA疫苗的同時共導(dǎo)入一定量的CpG-ODN或