降壓中藥鬼針草中總黃酮的分離純化及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立.pdf

1、本文對(duì)治療高血壓有效的鬼針草總黃酮的提取工藝、初步除雜工藝及精制工藝進(jìn)行了研究。得到一條合理的工藝流程，為鬼針草總黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)；對(duì)鬼針草藥材與總黃酮部位進(jìn)行了定性、定量研究，并初步建立了鬼針草藥材與總黃酮部位的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 本實(shí)驗(yàn)以提取液中總黃酮的量為指標(biāo)，用單因素實(shí)驗(yàn)確定正交實(shí)驗(yàn)的因素和水平，然后用正交設(shè)計(jì)法對(duì)影響提取效果的因素如乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)和提取時(shí)間進(jìn)行考察，優(yōu)化提取工藝。得出總黃酮的最佳提取工藝

2、為12倍量80％乙醇，連續(xù)提取3次，每次1.0 h。 本實(shí)驗(yàn)對(duì)鬼針草總黃酮的初步除雜工藝進(jìn)行了研究。對(duì)ZTC Ⅱ型天然吸附澄清劑的添加順序、添加量、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度和待澄清供試液濃度等單因素對(duì)澄清效果的影響進(jìn)行考察。得到澄清劑的作用條件為澄清劑添加量B組分為120 mg/100 ml；A組分為60 mg/100 ml、反應(yīng)時(shí)間為30 min、反應(yīng)溫度為40℃和待澄清供試液濃度為0.557 mg/ml。 對(duì)鬼針草總黃酮的

3、精制工藝進(jìn)行了研究。以鬼針草總黃酮的吸附率和解吸率為指標(biāo)，選擇合適的大孔吸附樹(shù)脂；以富集后總黃酮的純度為指標(biāo)，用正交設(shè)計(jì)法確定最佳純化工藝條件。實(shí)驗(yàn)證明D-101型大孔吸附樹(shù)脂對(duì)鬼針草總黃酮具有較好的吸附和解吸效果，其最佳工藝條件為：用濃度為4.378 mg/ml并且pH=6的藥液在徑高比為1:20的D-101型大孔吸附樹(shù)脂制成的柱子上以2 BV/h的速度進(jìn)行吸附，使大孔吸附樹(shù)脂的比吸附量達(dá)11.8mg/g。然后分別用4 BV的水和20

4、％的乙醇洗脫液洗脫，再用5 BV的70％的乙醇溶液以同樣的速度進(jìn)行解吸。這樣總黃酮的動(dòng)態(tài)洗脫率達(dá)86.7％，干膏中總黃酮的純度由4.0％提高到22.4％，提高了5.5倍。 對(duì)鬼針草總黃酮進(jìn)行了進(jìn)一步的精制。比較3種聚酰胺對(duì)鬼針草總黃酮的吸附率與解吸率，并從上樣藥液pH值、上樣濃度、最大吸附容量、洗脫溶劑的選擇等方面進(jìn)行了考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：60～80目聚酰胺對(duì)鬼針草總黃酮的吸附與解吸附較好，確定其最佳工藝條件為：濃度為2.0 m

5、g/ml并且pH=6的藥液在60-80目的聚酰胺柱子進(jìn)行吸附，使聚酰胺的比吸附量達(dá)11 mg／g。先用純化水洗脫除去極性較大雜質(zhì)成分，洗至Molish反應(yīng)(檢測(cè)還原性糖)為陰性后，然后用6 BV的20％的乙醇洗脫液洗脫；再用4 BV的30％的乙醇洗脫液洗脫；最后分別用2 BV的50％和70％的乙醇洗脫液。收集30％，50％和70％的乙醇洗脫液并分別濃縮制成干膏，測(cè)定富集后的總黃酮純度。實(shí)驗(yàn)表明用聚酰胺進(jìn)行進(jìn)一步精制的方法優(yōu)于溶劑萃取法(

6、乙醚、氯仿、乙酸乙酯)，有較高的轉(zhuǎn)移率和較好的富集效果。 本文建立鬼針草及其總黃酮部位的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在定性研究方面，采用理化鑒別和微乳薄層對(duì)鬼針草藥材和總黃酮部位進(jìn)行鑒別研究。理化鑒別表明鬼針草的提取液中含有黃酮類成分，微乳薄層法可檢出鬼針草藥材和總黃酮部位中的蘆丁和金絲桃苷。定量研究方面，應(yīng)用UV分光光度法建立鬼針草藥材與總黃酮部位中總黃酮含量的測(cè)定方法：應(yīng)用HPLC法建立鬼針草總黃酮部位中蘆丁含量的測(cè)定方法，以上含量測(cè)定方法經(jīng)