KLH-Aβ-,25-42-疫苗誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抗Aβ-,42-抗體的神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：探討羧基末端亞單位肽疫苗KLH-Aβ25-42接種BALB/c小鼠后誘導(dǎo)其特異性抗Aβ42抗體的產(chǎn)生情況以及該疫苗對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠主要臟器是否產(chǎn)生毒性作用，并更深入地通過原代培養(yǎng)新生BALB/c小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞體外檢測(cè)含有特異性抗Aβ42抗體的免疫小鼠血清對(duì)Aβ42神經(jīng)毒性作用的拮抗效果，從而為這種羧基末端亞單位肽疫苗KLH-Aβ25-42進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)于阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因模型動(dòng)物觀察其治療效果奠定基礎(chǔ)，并初步為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、 方法: ①間接ELISA法檢測(cè)KLH-Aβ25-42疫苗組和PBS對(duì)照組共20例BALB/c小鼠的血清和腦勻漿上清液中抗Aβ42抗體滴度；實(shí)驗(yàn)完畢后通過HE染色觀察實(shí)驗(yàn)小鼠主要臟器(心、肝、腎、脾、腦、肺)的組織形態(tài)。 ②原代培養(yǎng)新生BALB/c小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞3天后，在其DMEM培養(yǎng)液里加入終濃度為20mg/L的Aβ42，繼續(xù)培養(yǎng)4天后顯微鏡下觀察神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)；然后將不同濃度的KLH-Aβ25-42疫苗

3、免疫小鼠血清與經(jīng)含濃度為20mg/LAβ42的DMEM培養(yǎng)基預(yù)孵育的神經(jīng)細(xì)胞一起孵育培養(yǎng)7天后，用MTT法測(cè)定存活神經(jīng)細(xì)胞的吸光度A值。 結(jié)果: ①第2次接種后KLH-Aβ25-42疫苗組小鼠血清開始有特異性抗Aβ42抗體產(chǎn)生，與PBSX寸照組相比有顯著性差異，該抗體滴度隨著接種次數(shù)的增多而逐步增高；小鼠腦勻漿上清液中抗體滴度<1:10，與PBS對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；小鼠主要臟器的HE染色結(jié)果顯示亞單位肽疫苗KLH-A

4、β25-42未引起主要臟器組織形態(tài)學(xué)的病理性改變。 ②在含有Aβ42(終濃度為20mg/L)的DMEM培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)神經(jīng)元4天后，部分神經(jīng)元發(fā)生皺縮、脫壁，呈現(xiàn)明顯的死亡征象；在培養(yǎng)基中加入含既定濃度的KLH-Aβ25-42疫苗免疫小鼠血清繼續(xù)培養(yǎng)7天后用MTT法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞的存活率A值顯示，不同血清濃度的各處理組和陰性對(duì)照組相比較，1.5μl/孔以上濃度的免疫血清均能在一定程度上拮抗Aβ42片段對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的毒性作用，此拮抗作