肝素-超氧化物歧化酶結合物的制備及其防治輻射損傷作用與機制.pdf

1、近年來研究發(fā)現黏多糖類物質肝素(heparin)除具有抗凝血作用外,還能促進結合在內皮細胞(EC)表面的SOD的釋放從而起到抑制氧自由基的作用,另外它在防治肺損傷方面也受到醫(yī)學界的關注.因此,我們選擇肝素對SOD進行結構修飾以制備肝素-SOD結合物(HEP-SOD),并研究其生物學性質及對輻射損傷的防治作用.HEP-SOD的制備采用了兩種方法.第一種方法采用12%高碘酸鈉溶液4℃活化肝素20h,活化的肝素溶液與SOD在pH9.5、0.3

2、moL/L碳酸鹽緩沖液中進行修飾反應12h,經DEAE-FF凝膠柱(2.5cm×50cm)層析制備出修飾的SOD,命名為HEP<,IO4><'->-SOD;第二種方法是將氰尿酰氯溶于水與丙酮(1:2)的混合液中使呈飽和溶液,1 0min內滴加到肝素溶液中,濃堿調整保持pH8~9之間進行活化反應,得到的活化肝素溶液與SOD在0.1 mol/L、pH9.2的硼酸鹽緩沖液中進行修飾反應12h,經DEAE-FF凝膠柱(2.5cm×50cm)層析

3、分離出修飾的SOD,命名為HEPcc-SOD.對生物活性測定表明,兩種方法制備的SOD修飾物(HEP<,IO4><'->-SOD和HEP<,CC>-SOD)活性保持率基本相同;用TNBS法測定,兩者自由氨基修飾率相當;聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳檢測,兩者的電泳圖譜基本一致;穩(wěn)定性試驗表明,兩種HEP-SOD的熱穩(wěn)定性明顯優(yōu)于未修飾SOD.酶聯免疫法(ELISA)測定兩種HEP-SOD抗原性表明,兩種方法制備的HEP-SOD均基本不能

4、誘發(fā)家兔產生抗其自身的抗體,對誘發(fā)家兔抗SOD抗體的能力均降低為未修飾SOD的1/4.研究了HEP<,IO4><'->-SOD對輻射致DNA損傷的保護作用.在質粒pcDNA3溶液中加入相同活性單位的HEP<,IO4><'->-SOD、SOD和肝素與SOD混合物,用120 Gy的<'60>Coγ射線照射,用瓊脂糖電泳檢測,結果表明,各用藥組質粒DNA的損傷程度均低于未加藥組,其中,HEP<,IO4><'->-SOD組的損傷程度最低,且隨著