佛波酯聯(lián)合TP化療方案的抗腫瘤作用.pdf

1、背景與目的：
　　化療是惡性腫瘤治療的重要手段之一，長期臨床腫瘤化療所出現的耐藥性以及嚴重的不良反應常常導致化療失敗，因此，尋找可以逆轉腫瘤細胞耐藥或增加化療藥物敏感性的藥物、能夠減少化療藥物的嚴重不良反應或提高機體正常組織耐受高劑量化療的藥物，對改善腫瘤治療效果具有重要意義。
　　佛波酯是大戟科植物中廣泛存在的四環(huán)二萜類化合物，其中活性比較強的成分是12-O-十四烷酰佛波醇-13乙酸酯(12-0-Tetradecanoyl

2、-Phorbol-13-Acetate，TPA)，它是蛋白激酶C的激動劑。TPA具有多種生物學活性，作為潛在的抗白血病藥物研究已經完成Ⅰ期臨床試驗。順鉑、紫杉醇是臨床常用的抗腫瘤藥物，療效肯定，但順鉑的腎臟毒性、紫杉醇的骨髓抑制等不良反應成為劑量限制因素，同時也影響患者的生命質量。據文獻報道，TPA可以增加肺癌，卵巢癌，宮頸癌，白血病等腫瘤細胞對順鉑的敏感性，增加前列腺癌以及骨肉瘤細胞對紫杉醇的敏感性。臨床上腫瘤化療方案多數是聯(lián)合用藥，

3、其中順鉑和紫杉醇的聯(lián)合是肺癌、卵巢癌等多種腫瘤的化療方案，因此本研究擬考查TPA對以順鉑和紫杉醇聯(lián)用的TP方案是否具有增敏作用以及對TP方案毒性作用的影響，為探討腫瘤聯(lián)合化學治療的新方法提供實驗基礎。
　　方法：
　　1 TPA對TP方案的體外增敏作用
　　1.1細胞培養(yǎng)
　　人傳代肺癌A549、SPC-A-1細胞均在如下環(huán)境條件中培養(yǎng):溫度37℃±0.3℃，相對濕度≥95％，CO2濃度5％±0.1％。所用培養(yǎng)基

4、為含10％胎牛血清的1640。每3天傳代1次或視情況傳代。
　　1.2 TPA聯(lián)合順鉑和紫杉醇對腫瘤細胞增殖的影響
　　采用MTT比色法檢測藥物單用及聯(lián)合應用情況下腫瘤細胞抑制率的變化，繪制量效曲線。并進行統(tǒng)計學分析，評價三藥聯(lián)用對抗腫瘤作用的影響。
　　2 TPA對TP方案小鼠體內作用的影響
　　2.1 TPA對TP方案所致動物死亡率的影響
　　急性毒性實驗中，采用大劑量的順鉑和紫杉醇靜脈注射給藥，觀察T

5、PA對兩藥聯(lián)用所引起的小鼠的死亡率和存活時間的影響，并進行統(tǒng)計學分析。
　　2.2 TPA分別對順鉑和紫杉醇的劑量限制性毒性的影響
　　觀察TPA對順鉑的劑量限制性毒性腎毒性以及紫杉醇的骨髓抑制是否具有對抗作用，比較血肌酐、尿素氮、腎組織的病理變化以及外周血細胞，并進行統(tǒng)計學分析。
　　2.3荷瘤動物體內TPA對TP方案的抑瘤率和毒副作用的影響
　　運用昆明鼠皮下接種小鼠肝癌細胞H22，接種成功后給予順鉑和紫杉醇

6、以及TPA，觀察TPA能否提高TP方案的抑瘤率以及降低其毒性反應。
　　2.4TPA對TP方案所引起的腎臟氧化應激的影響
　　采用昆明鼠，觀察TPA對腎組織MDA，GSH，SOD的影響，并進行統(tǒng)計學比較，評價TPA的作用。
　　結果：
　　1 TPA對TP方案的體外增敏作用
　　1.1 TPA對細胞增殖的影響
　　TPA在小于5ng/ml的濃度下對A549和SPC-A-1細胞的增殖均無抑制作用，而在1

7、0ng/ml以上對該兩種細胞的增殖有明顯的抑制現象，并呈濃度依賴性。
　　1.2 TPA分別對順鉑和紫杉醇的增敏作用
　　1ng/ml和5ng/ml的TPA與順鉑共同作用72h之后對順鉑的增敏作用并沒有差異，因此實驗選用1ng/ml TPA與順鉑聯(lián)合作用72h，A549細胞中順鉑的IC50下降了65.87％（P＜0.05，與順鉑單用組相比），增敏倍數2.92倍。SPC-A-1細胞中，順鉑的IC50下降了59.84％（P＜0.

8、05，與順鉑單用組相比），增敏倍數為2.49倍。但是TPA對紫杉醇沒有增敏作用。
　　1.3 TPA對TP方案的增敏作用
　　1ng/ml的TPA與不同濃度的順鉑和紫杉醇聯(lián)合應用，共同作用72h之后，A549細胞中，順鉑的IC50下降了64.58％（P＜0.05，與順鉑聯(lián)合紫杉醇組相比），增敏倍數為2.82倍，在SPC-A-1細胞中，順鉑的IC50下降了51.29％(P＜0.05，與順鉑聯(lián)合紫杉醇組相比)，增敏倍數為2.05

9、倍。
　　2 TPA對TP方案小鼠體內作用的影響
　　2.1急性毒性實驗
　　急性毒性實驗中，一次性注射順鉑和紫杉醇之后，TP組動物死亡率為86.67％，而TPA聯(lián)合TP組動物的死亡率為26.67％，TPA單用組動物沒有出現死亡現象，并且TPA聯(lián)合TP組的存活時間要明顯高于TP組，結果提示TPA可以明顯的降低TP方案引起的動物的死亡，延長其存活時間。
　　2.2 TPA分別對順鉑和紫杉醇的劑量限制性毒性的影響

10、r>　　在順鉑的腎毒性中，TPA可以明顯的降低血清肌酐和尿素氮的含量(P＜0.01，具有統(tǒng)計學差異)，HE染色結果顯示，TPA聯(lián)合TP組與TP組相比，腎組織的損傷明顯減輕，腎小球充血輕微，并且腎小管擴張較TP組相比明顯降低。TPA單用組對動物的腎組織并沒有損傷現象，與對照組相比沒有明顯的差異。而TPA對紫杉醇的劑量限制性毒性，即骨髓抑制沒有保護作用，外周血細胞各組之間并沒有統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　2.3荷瘤動物體內TPA

11、對TP方案抑瘤率和毒性作用的影響
　　各組小鼠的瘤重顯示，TPA單用組瘤重與對照組動物瘤重相比并沒有統(tǒng)計學差異(P＞0.05); TP組與對照組相比差異顯著(P＜0.01)，并且TPA聯(lián)合TP組與TP組相比P＜0.05，差異也具有統(tǒng)計學意義。而各組動物的BUN和CRE， TPA聯(lián)合TP與TP組相比，差異也具有統(tǒng)計學意義。(P＜0.01)。腎組織的病理變化上來看，TPA聯(lián)合TP組與TP組相比，腎損傷輕微，腎小球充血不明顯，空泡形成較

12、少，球固縮也有明顯減輕。
　　2.4 TPA對TP方案所引起的腎臟氧化應激的影響
　　通過測定腎組織中MDA，GSH和SOD的含量，結果顯示，TP模型組與TPA聯(lián)合模型組相比，MDA、GSH和SOD含量兩組之間具有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)，而TPA組與正常對照組相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結論：
　　1.TPA體外可以增加肺癌細胞對TP方案的敏感性。
　　2.TPA體內可以增加TP方案的抗腫瘤