WWOX，STAT3與c-myc在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及相關(guān)性分析.pdf

1、目的:研究WWOX(WWdomain-containing oxidaseredurase)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(Signal transducer and activator oftranscription 3,STAT3)、c-myc在非小細(xì)胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)與肺正常組織中的表達(dá)及三者在非小細(xì)胞肺癌中的相互關(guān)系。
　　 方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法,檢測WWOX

2、、STAT3與c-myc在40例非小細(xì)胞肺癌組織、20例正常肺組織中的表達(dá)情況,并分析其與各臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系。NSCLC組織均為手術(shù)切除獲得,術(shù)前未作任何放療或化療。其中男性29例,女性11例,年齡35～78歲,其中<60歲者22例,≥60歲者18例。按WHO組織學(xué)分類、分期,鱗癌者26例,腺癌者14例；其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者18例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例；腫瘤≤3鋤者14例,>3cm者26例；高.中分化者30例,低分化者10例,Ⅰ-Ⅱ

3、期者24例,Ⅲ-Ⅳ期者16例。將標(biāo)本組織固定,脫水,浸蠟后制成組織蠟塊,常規(guī)4μm連續(xù)切片。切片常規(guī)脫蠟水化后,蒸餾水沖洗,磷酸鹽緩沖液(phosphate buffersaline,PBS)浸泡,高溫抗原修復(fù),3％H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性,并用正常山羊血清封閉交叉反應(yīng)。滴加一抗(STAT3兔抗人多克隆抗體,鼠抗人WWOX單克隆抗體,鼠抗人c-myc單克隆抗體)孵育,PBS沖洗后滴加生物素標(biāo)記二抗孵育,PBS沖洗后滴加辣根酶標(biāo)記

4、鏈霉卵白素工作液(S-A/HRP)孵育,PBS沖洗,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,透明,封片觀察。以胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒、網(wǎng)織狀或棕褐色團(tuán)塊為陽性細(xì)胞。其中WWOX蛋白的陽性表達(dá)信號(hào)主要在細(xì)胞漿中；STAT3蛋白在NSCLC組織中的陽性信號(hào)表達(dá)主要位于細(xì)胞漿中,少數(shù)位于細(xì)胞核中；c-myc蛋白的陽性表達(dá)信號(hào)主要位于細(xì)胞漿中。三者均采用半定量積分法判斷結(jié)果,即每張切片觀察10個(gè)高倍視野,每個(gè)高倍視野陽性細(xì)胞所占百分比與著色深淺進(jìn)行打分:(

5、1)根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比評(píng)分:陽性細(xì)胞數(shù)≤5％為0分,6％～25％為1分,26％～50％為2分,51％～75％為3分,>75％則為4分,(2)根據(jù)著色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:無顯色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分.取(1)(2)項(xiàng)評(píng)分的和值作為染色結(jié)果的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn):0分為陰性(一),1～3分為弱陽性(+),4～5分為陽性(++),6～7分為強(qiáng)陽性(+++)表達(dá)。
　　 結(jié)果:①WWOX在非小細(xì)胞肺癌組織中陽性表達(dá)為30％,

6、明顯低于肺正常組織(75％)；STAT3在非小細(xì)胞肺癌組織中陽性表達(dá)為92.5％,明顯高于肺正常組織(20％)；c-myc在非小細(xì)胞肺癌組織陽性表達(dá)為90％,明顯高于肺正常組織(15％)。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,它們各自在肺癌組織和正常肺組織中的表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。②WWOX基因的表達(dá)與年齡、性別以及組織類型、TNM分期、腫瘤大小及腫瘤組織分化程度無相關(guān)性,與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.01),在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺

7、癌組織中WWOX基因表達(dá)更少或缺失。STAT3、c-myc表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌組織學(xué)類型有關(guān),在腺癌組織中的表達(dá)明顯高于鱗癌(P<0.01),與年齡、性別以及腫瘤組織分化程度、TNM分期、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。③STAT3蛋白與WWOX在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.443,P<0.01)；④STAT3和c-myc蛋白在NSCLC組織中的表達(dá)無相關(guān)性(r=-0.084；P>0.05)；⑤WWOX和c-

8、myc蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)無相關(guān)性(r=0.115,P>0.05)。
　　 結(jié)論:①STAT3蛋白在NSCLC中的表達(dá)增高,顯著高于正常肺組織,同樣,在NSCLC中c-myc蛋白的表達(dá)也是增高的,并且顯著高于正常肺組織,說明過度表達(dá)的STAT3蛋白和c-myc蛋白可能均參與了非小細(xì)胞肺癌的形成過程。WWOX蛋白在NSCLC組織中呈低表達(dá),可能也參與了肺癌的形成機(jī)制。②WWOX基因的表達(dá)與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),在有淋巴結(jié)

9、轉(zhuǎn)移的肺癌組織中表達(dá)更少,其表達(dá)缺失或減少可能與腫瘤的侵襲性有關(guān)。STAT3、c-myc表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌組織學(xué)類型有關(guān),在腺癌組織中的表達(dá)明顯高于鱗癌,與患者的年齡、腫瘤大小、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期無關(guān),組織學(xué)類型不同,其影響機(jī)制也不同,提示它們可能只在腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮作用,而與腫瘤進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移無關(guān)。③STAT3蛋白與WWOX蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),在STAT3表達(dá)越高的肺癌組織中,WWOX的表達(dá)越少或表達(dá)缺失,兩