肝細胞肝癌中STAT3和c-myc作用的初步研究.pdf

1、目的：(1)檢測STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝癌SMMC-7721細胞以及肝細胞肝癌組織中的表達。 (2)抗體干預后觀察STAT3及c-myc對肝癌SMMC-7721細胞增殖和凋亡的影響以及兩者的相互關(guān)系，探討兩者在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：(1)免疫細胞化學及RT-PCR方法觀察STAT3及c-myc在肝癌細胞SMMC-7721中的表達。 (2)免疫組織化學方法檢測STAT3蛋白及c-myc蛋白在肝細胞

2、肝癌組織中的表達。 (3)分別單獨應用STAT3及c-myc的抗體及兩種抗體聯(lián)合應用后，MTT法檢測肝癌細胞SMMC-7721的增殖情況，應用流式細胞儀檢測細胞凋亡，RT-PCR技術(shù)檢測STAT3及c-myc mRNA表達的變化。 結(jié)果: (1)STAT3及c-myc在肝癌細胞SMMC-7721中均有表達。STAT3蛋白和c-myc蛋白均主要表達于細胞漿。 (2)應用抗STAT3抗體干預后檢測到肝癌細胞SMMC-

3、7721增殖受到抑制，呈現(xiàn)時間、劑量依賴性。20μg/mL處理組和40μg/mL處理組與10μg/mL處理組比較，抑制率具有顯著差異(p<0.05)。20μg/mL處理組和40μg/mL處理組比較，抑制率無顯著差異(p＞0.05)。 (3)應用抗c-myc抗體干預后SMMC-7721細胞增殖受到抑制，細胞活力下降，呈現(xiàn)時間、劑量依賴性，20μg/mL處理組和40μg/mL處理組與10μg/mL處理組比較，抑制率具有顯著差異(P<

4、0.01)。20μg/mL處理組和40μg/mL處理組比較，抑制率無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 (4)聯(lián)合應用抗STAT3及抗C-myc抗體干預后，MTT結(jié)果顯示對細胞增殖的抑制作用呈時間、劑量依賴性。在24h處理組和48h處理組，聯(lián)合應用抗體對SMMC-7721細胞增殖的抑制率高于單用一種抗體處理組，具有統(tǒng)計學差異(P＜.05)。72h處理組與單用一種抗體處理組相比，抑制率無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 (5)流式細

5、胞術(shù)檢測顯示單獨應用抗STAT3和抗c-myc抗體及兩者聯(lián)合應用后，細胞的早期凋亡率從對照的0.88％增加到7.12％、10.6％和15.5％，晚期凋亡細胞比率從對照的1.00％增加到3.12％、5.32％和7.14％，聯(lián)合應用抗STAT3及抗c-myc抗體處理的細胞凋亡率高于單用一種抗體處理組。 (6)RT-PCR檢測顯示應用抗STAT3抗體作用于細胞48h，c-myc mRNA的表達下降；聯(lián)合應用兩種抗體處理細胞48h，c-

6、myc mRNA的表達明顯降低，(7)聯(lián)合應用抗體作用于細胞48h，RT-PCR檢測顯示STAT3 mRNA的表達較對照組降低。 (8)STAT3在33例肝細胞肝癌組織中表達，c-myc在32例肝細胞肝癌組織中表達，不同分化程度的肝細胞肝癌中STAT3，c-myc的表達差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結(jié)論: (1)肝癌細胞SMMC-7721中存在STAT3及c-myc信號的過度激活。 (2)抑制STAT3基因

7、或者c-myc基因以及同時抑制STAT3和c-myc基因可以抑制肝癌SMMC-7721細胞增殖，誘導細胞凋亡。提示STAT3基因和c-myc基因在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。 (3)STAT3和c-myc基因在人肝細胞肝癌組織中過表達，STAT3，c-myc的表達強度與肝細胞肝癌的病理分級呈正相關(guān)，提示STAT3和c-myc基因參與了肝癌的惡性轉(zhuǎn)化。 (4)抗STAT3抗體作用于肝癌SMMC-7721細胞，可以抑制c