貓運(yùn)動(dòng)區(qū)皮質(zhì)伽瑪?shù)墩丈浜蠹?xì)胞凋亡與病理形態(tài)學(xué)變化的研究.pdf

1、目的：目前，應(yīng)用伽瑪?shù)吨委煱d癇的病例越來(lái)越多，臨床上雖然取得一定效果，但尚有爭(zhēng)議，尤其在伽瑪?shù)吨委煱d癇方面的放射生物學(xué)的基礎(chǔ)研究比較薄弱。本實(shí)驗(yàn)以健康貓的腦額葉運(yùn)動(dòng)區(qū)皮質(zhì)作為照射靶點(diǎn)，給予不同的伽瑪?shù)墩丈鋭┝?，觀察照射后不同時(shí)間點(diǎn)腦額葉運(yùn)動(dòng)區(qū)皮質(zhì)的形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞凋亡和bcl-2蛋白的表達(dá)情況，探討γ射線誘發(fā)細(xì)胞凋亡的時(shí)間與劑量效應(yīng)的關(guān)系及其分子機(jī)制，為臨床上伽瑪?shù)吨委煿δ軈^(qū)癲癇、腫瘤等疾病選擇合適治療劑量，減少放射性腦損傷提供了理論和

2、實(shí)驗(yàn)的依據(jù)。 方法：選用健康家貓96只，雌雄不限，體重2500～3500克。分為正常對(duì)照組、伽瑪?shù)?5Gy照射組和伽瑪?shù)?0Gy照射組，每組32只；觀察時(shí)間點(diǎn)為伽瑪?shù)墩丈浜?d、2d、3d、7d、14d，共五個(gè)時(shí)間點(diǎn)。每一組每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)選取6只健康家貓，正常對(duì)照組動(dòng)物不進(jìn)行伽瑪?shù)墩丈洌韮山M動(dòng)物分別給予不同劑量伽瑪?shù)墩丈?，于上述不同時(shí)間點(diǎn)處死后，取腦組織制成石蠟切片，然后，用免疫組化的方法檢測(cè)bcl-2蛋白，用原位末端標(biāo)記法

3、(TUNEL法)檢測(cè)腦細(xì)胞凋亡。另外，于照射后14d，每組選取2只動(dòng)物進(jìn)行MRI檢查后，取標(biāo)本進(jìn)行透射電子顯微鏡觀察超微組織結(jié)構(gòu)改變。所有的數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)，用SAS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析比較，以P<0.05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1 動(dòng)物一般情況：所有試驗(yàn)動(dòng)物均在伽瑪?shù)墩丈浜?～8小時(shí)后完全清醒，逐漸恢復(fù)飲食，未出現(xiàn)肢體偏癱等癥狀，50Gy照射組動(dòng)物1周內(nèi)精神萎靡，攝食較差，活動(dòng)少，1周后恢復(fù)正常。

4、 2 MRI觀察大腦影像學(xué)改變：15Gy和50Gy照射組動(dòng)物于照射后14d時(shí)行MRI掃描，均未發(fā)現(xiàn)明顯的壞死病灶。 3 光鏡下腦細(xì)胞形態(tài)改變：15Gy照射組動(dòng)物伽瑪?shù)缎g(shù)后14d內(nèi)光鏡下未見(jiàn)到神經(jīng)元變性改變，50Gy伽瑪?shù)缎g(shù)后14d內(nèi)光鏡下可見(jiàn)神經(jīng)元變性，噬神經(jīng)細(xì)胞現(xiàn)象。 4 透射電鏡細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果：15Gy照射組2周時(shí)電鏡下神經(jīng)元細(xì)胞核形態(tài)正常，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張。50Gy照射組電鏡下出現(xiàn)神經(jīng)元核內(nèi)液泡，核固縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基

5、復(fù)合體擴(kuò)張。 5 腦細(xì)胞凋亡改變：(1)伽瑪?shù)墩丈浣M在照射后細(xì)胞凋亡呈增加的趨勢(shì)。與對(duì)照組比較，15Gy和50Gy照射組在照射后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率均有增高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異有顯著性(P<0.05)。(2)每一個(gè)伽瑪?shù)墩丈浣M在照射后不同時(shí)間點(diǎn)凋亡細(xì)胞的動(dòng)態(tài)表達(dá)有一定的規(guī)律性，即照射后1d，凋亡細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)即開(kāi)始升高，2d達(dá)到最高峰，以后逐漸降低，到14d時(shí)仍高于正常對(duì)照組。(3)對(duì)每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)與

6、照射劑量有一定相關(guān)性，照射劑量越高，凋亡細(xì)胞表達(dá)的越明顯。50Gy照射組凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率均高于15Gy照射組，經(jīng)q檢驗(yàn)，兩個(gè)照射組只有在照射后2d，凋亡細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率差別有顯著性(P<0.05)。 6 腦細(xì)胞bcl-2蛋白表達(dá)水平改變：(1)伽瑪?shù)墩丈浣M在照射后bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率呈降低的趨勢(shì)。與對(duì)照組比較，15Gy和50Gy照射組在照射后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，bcl-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均低于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異有顯著性(P<

7、0.05)。(2)每一個(gè)伽瑪?shù)墩丈浣M在照射后不同時(shí)間點(diǎn)bcl-2蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)有一定的規(guī)律性，即照射后1d，bcl-2蛋白表達(dá)即開(kāi)始降低，2d達(dá)到最低值，以后逐漸回升，到14d時(shí)仍低于正常對(duì)照組。(3)對(duì)同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，bcl-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與照射劑量有一定相關(guān)性，照射劑量越高，bcl-2蛋白降低的越明顯。50Gy照射組bcl-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)均低于15Gy照射組但經(jīng)兩兩比較q檢驗(yàn)，差別無(wú)顯著性(P>0.05)。 結(jié)論：

8、 1 邊緣劑量15Gy，等劑量曲線50％屬于伽瑪?shù)吨委煹陌踩珓┝?；邊緣劑?0Gy，等劑量曲線50％照射14d可引起神經(jīng)元變性，其長(zhǎng)期改變有待更深入地研究。 2 本研究提示15Gy照射組術(shù)后引起放射性腦損傷的機(jī)率較低，為臨床上應(yīng)用低劑量(邊緣劑量10～15Gy，等劑量曲線40～60％)伽瑪?shù)吨委煱d癇提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 3 伽瑪?shù)墩丈湄堈ｎ~葉運(yùn)動(dòng)區(qū)皮質(zhì)14d內(nèi)，細(xì)胞凋亡數(shù)量的改變與照射劑量呈正相關(guān)；腦細(xì)胞bcl-2蛋