大葉藻形態(tài)學(xué)與細(xì)胞學(xué)研究.pdf

1、大葉藻是海洋高等種子植物，具有完整的根、莖、葉系統(tǒng)分化，屬于單子葉植物綱（Monocotyledoneae）眼子菜科（Potamo-getonaceae）大葉藻屬（Zostera）。海草及大葉藻形成的海草場在近海海洋生態(tài)系統(tǒng)中扮演著許多重要角色，對維護(hù)海洋生態(tài)系統(tǒng)的健康具有重要作用和意義，同時(shí)還可作為飼料和肥料等，因此其還具有一定的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來，對大葉藻屬植物各方面的深入研究也逐漸成為研究的熱點(diǎn)之一。本文以大葉藻為實(shí)驗(yàn)材料，通過徒手

2、切片和石蠟切片的方法對大葉藻葉片和種子胚的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察研究，為大葉藻組織培養(yǎng)和無性繁殖提供了依據(jù)；試驗(yàn)了幾種常用的消毒劑分別對大葉藻種子和幼苗進(jìn)行無菌處理，分別得到對種子和幼苗的最佳消毒方法；利用無菌技術(shù)培養(yǎng)大葉藻無菌苗，得到制備原生質(zhì)體的最佳實(shí)驗(yàn)條件，并對大葉藻原生質(zhì)體培養(yǎng)條件進(jìn)行了探索實(shí)驗(yàn)。本研究所用方法和取得的成果如下：
　　1、研究了固定方法、脫水及浸蠟時(shí)間、染色方式對大葉藻胚石蠟切片制作效果的影響。結(jié)果表明，采用

3、標(biāo)準(zhǔn)固定液（FAA）固定48h以上，脫水每級梯度時(shí)間2h，分3次浸蠟（每次30min），蘇木精伊紅染色，可制作出染色清晰、組織結(jié)構(gòu)完整的大葉藻胚切片。
　　2、為探尋大葉藻組織培養(yǎng)中外植體的最佳消毒方法，采用75％乙醇、1.5%碘化鉀、4%次氯酸鈉和10%雙氧水這4種消毒劑以及不同的處理時(shí)間組合，對大葉藻種子和幼苗進(jìn)行消毒試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果，最有效的外植體消毒方法為：對大葉藻幼苗，先用無菌水沖洗3～4次，再以75%乙醇處理20 s，然

4、后再用無菌水沖洗3～4次，可以達(dá)到較好的消毒效果。對大葉藻種子，先以75%乙醇處理10 min，再以1.5%碘化鉀處理10 min，然后用無菌海水沖洗3～4次，這樣消毒效果最佳，且不影響種子的發(fā)芽率。
　　3、將上述消毒處理好的種子分別接種到鹽度為5‰和30‰的無菌抽濾海水中，放入恒溫光照培養(yǎng)箱內(nèi)，在溫度15℃，濕度60%，光照強(qiáng)度40μmol m?2 s?1條件下（L:D=12:12）培養(yǎng)促進(jìn)種子的萌發(fā)。種子萌發(fā)后，轉(zhuǎn)接到正常鹽

5、度的滅菌海水中，在溫度15℃，濕度60%，光照強(qiáng)度40μmol m?2 s?1條件下（L:D=12:12）培養(yǎng)直至成苗。此方法可快速簡便地培養(yǎng)大葉藻無菌苗。
　　4、在大葉藻原生質(zhì)體制備時(shí)，用2%纖維素酶和0.5%果膠酶的組合，用0.5mol/L山梨醇做滲透壓調(diào)節(jié)劑，酶解液pH為4.0，酶解48小時(shí)是最佳酶解條件。原生質(zhì)體產(chǎn)量為1.95-3.96×106個(gè)/ml，存活率為80-90%。
　　本論文深入研究了大葉藻胚和葉片的組