黃精中小分子糖類成分的研究.pdf

1、目的:通過實驗揭示炮制對黃精中多糖、小分子糖等糖類成分的影響;在此基礎(chǔ)上對黃精小分子糖部位的藥理活性進(jìn)行研究,為黃精中小分子糖的研究開發(fā)和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù);利用現(xiàn)代波譜及色譜技術(shù)對低聚糖的分離純化和結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究,為進(jìn)一步研究黃精的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及低聚糖系列產(chǎn)品的開發(fā)提供方法參考;優(yōu)選適合工業(yè)化生產(chǎn)的最佳提取純化工藝,為開發(fā)利用黃精中小分子糖類和提高黃精的商品價值奠定基礎(chǔ)。
　　方法:(1)采用苯酚-硫酸法分別對常壓和高壓蒸制黃

2、精樣品中的總糖、多糖和小分子糖進(jìn)行含量測定,揭示炮制后黃精中多糖、小分子糖等糖類成分的變化規(guī)律;(2)采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法建立免疫抑制模型,考察黃精中小分子糖對環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)和吞噬百分率、溶血素和溶血空斑形成的影響;(3)采用D101大孔吸附樹脂柱、活性炭柱層析、SephadexLH-20凝膠柱層析等一系列方法對黃精中低聚糖進(jìn)行分離純化,對于得到的低聚糖樣品進(jìn)行理化性質(zhì)鑒別;苯酚-硫酸法測定其總糖含量;

3、HPGPC測定純度和分子量;薄層層析和乙?；疓C分析單糖組成;利用紅外光譜、1HNMR和13CNMR對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行進(jìn)一步分析;(4)以黃精中小分子糖含量為指標(biāo),考察提取溫度、時間、次數(shù)、料液比等因素對小分子糖提取率的影響,在單因素實驗的基礎(chǔ)上,利用正交試驗法對黃精中小分子糖的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化;通過比較AB-8、D101、XDA-6和LSA-20四種大孔吸附樹脂對小分子糖的純化性能,篩選出較合適的樹脂并確定最佳的上樣量、上樣濃度、洗脫劑

4、用量和洗脫流速。
　　結(jié)果:(1)常壓和高壓蒸制黃精樣品中多糖含量均隨蒸制時間的延長呈下降趨勢,常壓蒸制黃精樣品中小分子糖含量50h前呈下降趨勢,50h～70h含量變化趨勢不明顯?？傮w來看,小分子糖含量在蒸制時間20h前最高,且變化較為平緩;(2)黃精中小分子糖能夠顯著提高環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對雞紅細(xì)胞的吞噬指數(shù)和吞噬百分率,可顯著促進(jìn)溶血素和溶血空斑的形成;(3)分離純化得到1個低聚糖樣品HJG-1:灰白色疏松粉末

5、,純度較高,總糖含量為91.29％,分子量為1471,為單一葡萄糖組成的D—吡喃葡聚糖,分子結(jié)構(gòu)中葡萄糖的連接方式主要為1→3和1→4,苷鍵構(gòu)型以β—糖苷鍵為主,還含有少量的α—糖苷鍵;(4)黃精中小分子糖的最佳提取工藝為提取溫度90℃,料液比1:30,提取時間2h;優(yōu)選的樹脂純化方法即將約4倍柱床體積的濃度為36.32mg/ml的黃精小分子糖溶液通過AB-8大孔吸附樹脂柱,進(jìn)行動態(tài)吸附,用約8倍柱床體積的蒸餾水洗脫,流速1.0ml/m