珠蚌軟體中小分子活性物質的研究.pdf

1、本論文來源于江蘇省高新技術產業(yè)化課題《江蘇地產蚌類資源深加工產品的研究開發(fā)》，編號：JHB05-26。珠蚌具有豐富的營養(yǎng)成分和良好的藥用價值。本實驗室前期實驗主要對珠蚌軟體多糖及其活性進行了深入研究。本課題旨在研究珠蚌除多糖及蛋白質等大分子以外的小分子活性物質。從珠蚌水提醇沉上清液的成分分離鑒定及其活性篩選入手，對珠蚌水提醇沉上清液浸膏及其石油醚、正丁醇萃取物進行了成分與活性研究。本論文的主要研究內容包括以下幾個部分：
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2、.文獻研究
　　 查閱有關珠蚌的研究文獻，了解珠蚌的歷史沿革和現代研究進展。查閱有關淡水及海洋貝類的文獻，了解貝類主要可能含有的物質及其生物活性，為實驗設計和實驗內容奠定文獻資料基礎。
　　 2.珠蚌水提醇沉上清液部分的成分定性鑒別
　　 根據前期成熟完善的工藝路線和操作步驟，從珠蚌軟體中提取多糖后的水提醇沉上清液浸膏入手，對水提醇沉上清液進行成分的預試驗研究。結果發(fā)現：石油醚萃取部分含有油脂和甾類物質，正丁醇萃

3、取部分主要含有甾類物質、糖苷類、生物堿類、有機酸類物質，水殘留液中主要有氨基酸、糖類物質等。
　　 3.珠蚌水提醇沉上清液浸膏的活性篩選
　　 根據古籍記載，珠蚌水煎液具有“解熱毒，托斑疹，解痘毒”的功效，故活性研究首先從抗炎實驗入手。通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗和棉球肉芽腫實驗來觀察珠蚌水提醇沉上清液的抗炎作用。結果證明珠蚌水提醇沉上清液對小鼠耳廓腫脹、小鼠棉球肉芽腫的形成均有明顯的抑制作用。說明珠蚌水提醇沉上清液中含

4、有具有抗炎活性的小分子物質。將水提醇沉上清液通過分別用石油醚和正丁醇萃取，分成石油醚層、正丁醇層和萃取后水層，繼續(xù)進行有效部位篩選。珠蚌水提醇沉上清液中石油醚、正丁醇萃取部位對小鼠耳廓腫脹、小鼠棉球肉芽腫的形成均有明顯的抑制作用，說明這兩個部位含有抗炎活性物質。
　　 4.珠蚌石油醚萃取部位成分的研究
　　 通過前期實驗，發(fā)現石油醚萃取部位有明顯的抗炎活性，故對該部位成分進行進一步研究。將該部位浸膏采用硅膠柱層析分離，以

5、石油醚-乙酸乙酯不同配比梯度洗脫，分離得到脂肪酸部分和甾醇部分。通過GC-MS技術對珠蚌脂肪酸的組成進行了分析，共鑒定出14種脂肪酸，其中飽和脂肪酸8種，主要為十六烷酸(軟脂酸)、十七烷酸、十八烷酸(硬脂酸)等，占脂肪酸總量的29.24％。含不飽和脂肪酸6種，主要有9-十六碳烯酸、9-十八碳烯酸(油酸)、9，12-十八碳二烯酸(亞油酸)、5，8，11，14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)等，占總量的42.59％，明顯高于飽和脂肪酸。從石油醚

6、萃取部位得到珠蚌甾醇，繼續(xù)分離獲得的樣品，經碳氫等色譜、光譜分析表明該甾醇為混合物。
　　 5.珠蚌石油醚萃取部位的脂肪酸類和甾醇類物質抗炎活性研究
　　 通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗和珠蚌甾醇對小鼠腹腔巨噬細胞炎癥因子釋放影響實驗，發(fā)現珠蚌甾醇類物質對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，而脂肪酸則無明顯作用。珠蚌甾醇在濃度為50ug/mL、25ug/mL和12.5ug/mL均能顯著抑制脂多糖誘導的小鼠巨噬細胞釋放N

7、O、TNF-α及IL-1等細胞炎性因子。
　　 6.珠蚌中核苷類物質的研究
　　 前期實驗從正丁醇浸膏中檢測到尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷及胸腺嘧啶，論文從珠蚌中檢測到核苷類物質并對五種主要成分進行了含量測定。以珠蚌中各核苷含量的比例進行配伍，通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗、小鼠棉球肉芽腫實驗來觀察核苷的抗炎作用。結果表明珠蚌中所含的核苷對二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹與小鼠棉球肉芽腫的形成都具有明顯的抑制作用。說明核苷類成分