海參主要鞘脂類物質(zhì)的分子種分析及活性初探.pdf

1、海參屬于棘皮動(dòng)物門海參綱，自古就因其較高的食用和藥用價(jià)值而被列為“八珍”之首。海參中鞘脂類主要為腦苷脂和神經(jīng)酰胺，在多種生物活性方面如抗腫瘤、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)等均具有突出活性。但海參腦苷脂和神經(jīng)酰胺組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜，種類繁多，難以進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和分子種分析。因此，迫切需要建立一種快速有效的鑒定方法。
　　本論文對(duì)多種海參中鞘脂類物質(zhì)進(jìn)行了定性定量測(cè)定，并采用高效液相制備法成功制備出了三種長(zhǎng)鏈堿單體，最后對(duì)葉瓜參腦苷脂、神經(jīng)酰胺和長(zhǎng)鏈堿進(jìn)行了

2、HepG2腫瘤細(xì)胞增殖活性實(shí)驗(yàn)。主要結(jié)論如下：
　　1.本文通過采用HPLC-ELSD法，以TSKgel CN-80Ts柱為分離柱，正己烷-異丙醇-二氯甲烷-甲醇為流動(dòng)相，對(duì)20種海參樣品的腦苷脂和神經(jīng)酰胺進(jìn)行了同時(shí)測(cè)定。結(jié)果表明不同種海參中腦苷脂和神經(jīng)酰胺含量存在較為明顯的差異，含量范圍分別為0~4.44mg/g和0.24~2.21 mg/g。
　　此外，采用LC-ESI-QQQ方法，分析了仿刺參、革皮氏海參、白乳參、海地

3、瓜、阿拉斯加紅參、阿拉斯加刺參、葉瓜參等七種不同品種海參及三種不同產(chǎn)地仿刺參的腦苷脂分子種組成，以及葉瓜參、仿刺參、海地瓜三種海參的神經(jīng)酰胺組成。結(jié)果表明七種海參腦苷脂分子種組成存在明顯差異，阿拉斯加紅參腦苷脂分子種組成最復(fù)雜，有58種腦苷脂單體。根據(jù)分子種組成結(jié)果推測(cè)出d17:1為海參的特征長(zhǎng)鏈堿結(jié)構(gòu)，d17:1-C24:1h為特征性腦苷脂分子。海參腦苷脂的聚類分析結(jié)果表明腦苷脂分子種分類與海參品種顯著相關(guān)。三種不同產(chǎn)地的仿刺參腦苷脂

4、分子種分析表明，腦苷脂的分子種組成與產(chǎn)地有關(guān)。海地瓜、葉瓜參和仿刺參的神經(jīng)酰胺分子種的結(jié)果表明，海參中神經(jīng)酰胺與腦苷脂的脂肪酸和長(zhǎng)鏈堿組成相似，但比例不同，可能與其體內(nèi)合成代謝途徑有關(guān)。
　　通過對(duì)海參樣品中腦苷脂和神經(jīng)酰胺的定性定量分析，可以初步明確不同種海參腦苷脂間存在的顯著差異與海參的種類、地域等因素的聯(lián)系，為日后腦苷脂指紋圖譜的建立奠定基礎(chǔ)，為海參等食（藥）用水產(chǎn)品的開發(fā)利用、營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制等提供理論研究基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)

5、。
　　2.通過酸水解方法水解葉瓜參總脂得到長(zhǎng)鏈堿組分，通過柱層析純化后得到純度為94.7％的總長(zhǎng)鏈堿。采用HPLC方法，以TSKgel ODS-4柱為分離柱，甲醇-PBS溶液為流動(dòng)相，成功分離出d17:1，d18:2，d18:3的三種LCB單體。為研究海參鞘脂類物質(zhì)的構(gòu)效關(guān)系提供了依據(jù)和方法參考。
　　3.研究了葉瓜參中的神經(jīng)酰胺、腦苷脂系列物和長(zhǎng)鏈堿單體的HepG2細(xì)胞增殖活性增殖實(shí)驗(yàn)，使用MTT法檢測(cè)受試物在24h及4

6、8h對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明，葉瓜參的6種鞘脂類物質(zhì)中僅長(zhǎng)鏈堿單體（d17:1，d18:2）具有極顯著抑制HepG2細(xì)胞增殖的活性，且呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。d17:1，d18:2對(duì)HepG2細(xì)胞24 h和48 h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為和5.22、5.24μg/mL以及4.96、5.32μg/mL。腦苷脂和神經(jīng)酰胺幾乎沒有顯著抑制HepG2細(xì)胞增殖的作用。結(jié)果表明海參長(zhǎng)鏈堿不僅是鞘脂類的骨架成分，也是重要的抗腫瘤活