海洋球石藻(Emiliania huxleyi)鞘脂類的液質(zhì)分析及其活性初探.pdf

1、鞘脂類是目前脂類研究的熱點之一，其代謝產(chǎn)物（如神經(jīng)酰胺、鞘氨醇及各種鞘糖脂等）具有較強的生物活性，作為信號分子參與細(xì)胞分化、增殖、免疫、凋亡及衰老等重要生理活動，特別是作為一種新型膳食營養(yǎng)成分和藥用成分對人體健康具有重要影響。目前對于鞘脂的研究主要集中在高等動植物，對海洋生物中鞘脂的研究還很少。海洋微藻因其繁殖快、種類多、數(shù)量大，含有多種活性物質(zhì)，已成為新型天然產(chǎn)物的主要來源。海洋球石藻（Emiliania huxleyi）是一種海洋真

2、核浮游植物，能夠產(chǎn)生豐富的次級代謝生物活性物質(zhì)，特別是該藻被特異性病毒感染后能夠合成新的具有獨特結(jié)構(gòu)的鞘糖脂，該結(jié)構(gòu)的鞘糖脂具有較高的生物學(xué)活性，有望開發(fā)為新型的天然食品醫(yī)藥資源。
　　本研究以海洋球石藻E.huxleyi BOP92和特異性裂解病毒EhV99B1為研究材料，建立了鞘脂標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜檢測方法，初步明確了鞘脂的質(zhì)譜學(xué)規(guī)律;在此基礎(chǔ)上建立了適用于海洋球石藻細(xì)胞中粗脂的提取方法和超高效液相色譜-四級桿和軌道阱雜交傅里葉變換

3、超高分辨率質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-Q-Exactive-MS)的分析檢測方法，分析了病毒感染前后，海洋球石藻細(xì)胞中鞘脂的組成及含量變化。主要研究結(jié)果如下:
　　首先對海洋球石藻細(xì)胞總脂進(jìn)行了熒光觀察和薄層色譜(TLC)分析。熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示，病毒感染的藻細(xì)胞中中性脂質(zhì)積累明顯增加，細(xì)胞核遺傳物質(zhì)片段化;TLC結(jié)果顯示藻細(xì)胞總脂中中性脂質(zhì)的含量比例較高，且病毒感染在一定程度上影響宿主藻細(xì)胞脂質(zhì)的組成和含量，特別是能夠促進(jìn)中性脂質(zhì)的

4、合成和積累;球石藻細(xì)胞總脂粗提物具有一定抗氧化和抗腫瘤活性，病毒感染后藻細(xì)胞粗脂具有更強的總還原能力，球石藻粗脂對正常肝細(xì)胞LO2和肝癌細(xì)胞Hep G2的生長具有抑制或刺激作用，且與粗脂的濃度相關(guān)。
　　將鞘脂的標(biāo)準(zhǔn)品直接進(jìn)行質(zhì)譜分析，在正負(fù)離子模式下探索鞘脂的質(zhì)譜學(xué)規(guī)律。結(jié)果顯示，鞘脂更易在正離子模式下離子化，且鞘脂分子發(fā)生類似的結(jié)構(gòu)斷裂，產(chǎn)生的離子碎片或中性丟失可以提供鞘脂的結(jié)構(gòu)信息，因此解析質(zhì)譜圖的離子碎片可以確定鞘脂的種類

5、及結(jié)構(gòu)。鞘脂的特征離子碎片為鞘氨醇骨鏈脫去兩分水時產(chǎn)生的離子碎片，例如鞘脂的長鏈堿基為d18∶1、t18∶0，在正離子模式下其特征離子碎片的質(zhì)荷比為264.3、282.3。
　　在上述基礎(chǔ)上，進(jìn)一步建立了UPLC-Q-Exactive-MS分析手段，用于檢測病毒感染前后藻細(xì)胞中鞘脂的組成及含量變化情況。結(jié)果鑒定出了13種鞘脂，其中神經(jīng)酰胺的含量最高，可達(dá)鞘脂總含量的99％以上，其結(jié)構(gòu)多為帶兩個羥基的C18長鏈堿基和不帶羥基的C20