液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)篩查及測定海水和藻體中脂溶性藻毒素.pdf

1、脂溶性藻毒素是海洋中藻類產(chǎn)生的一類次生代謝產(chǎn)物,包括大田軟海綿酸(OA)系列毒素、蛤毒素(PTX)系列毒素、扇貝毒素(YTX)系列毒素、原多甲藻酸(AZA)系列毒素等多系列毒素。脂溶性藻毒素可在貝類體內(nèi)富集或轉(zhuǎn)化,人類食用染毒貝類后會引起多種嚴重的中毒反應(yīng)。近年來,由可產(chǎn)生脂溶性藻毒素的藻類引起的有害藻華對生態(tài)系統(tǒng)和人類健康造成了嚴重危害。迄今為止,國內(nèi)外有關(guān)脂溶性藻毒素的研究報道主要集中于貝類和藻體中的脂溶性藻毒素,對海洋環(huán)境中的藻毒

2、素研究較少,目前仍缺乏有效檢測海水中脂溶性藻毒素的方法,而對海水中脂溶性藻毒素進行快速篩查和測定,對監(jiān)測有害藻華發(fā)生后的水質(zhì),研究藻毒素的海洋環(huán)境行為等具有重要意義。本研究開發(fā)了可應(yīng)用于海水和藻體中多種脂溶性藻毒素篩查及測定的樣品前處理方法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法并應(yīng)用于實際樣品檢測,對青島近岸海域海水中典型脂溶性藻毒素分布作了大致分析并對其富集方法作了初探,具體內(nèi)容如下:
　　1.對高效液相色譜-多級質(zhì)譜法在堿性和酸性兩種不同分

3、離體系下檢測3種典型脂溶性藻毒素OA、YTX、PTX2的效果進行了比較。結(jié)果表明,堿性分離體系較之酸性體系具有更好的分離度;多級質(zhì)譜分析中OA和YTX在堿性體系和酸性體系中的選擇母離子都為[M+Na]+(m/z827.7)和[M-H]-(m/z1141.8),而PTX2則分別為[M+NH4]+(m/z876.7)和[M+Na]+(m/z881.7);在兩種體系下建立的線性回歸方程R2值均大于0.99,YTX在兩種體系中的儀器檢測限(LO

4、D)均為0.79pg,而OA和PTX2在堿性分離體系中的儀器檢測限(分別為0.68pg和0.13pg)低于兩者在酸性體系中的儀器檢測限(分別為1.37pg和0.65pg);酸性分離體系較之堿性體系具有更好的精密度?？傮w而言,堿性分離體系具有更好的適用性。
　　2.建立了海水和藻體中多種脂溶性藻毒素同步篩查分析的新方法。采用固相萃取法用于海水樣品中多種脂溶性藻毒素的富集,并與液液萃取法進行了對比,結(jié)果表明固相萃取法對不同脂溶性藻毒素

5、具有更好的回收率(55.18％~69.94%),重復(fù)性較好并且有機溶劑消耗少,更適于海水中多種脂溶性藻毒素的富集。發(fā)展了超聲波細胞破碎法并超聲波輔助提取法提取有毒藻體中的脂溶性藻毒素,該方法回收率良好(73.40%~79.77%),能滿足藻體樣品中多種脂溶性藻毒素篩查分析的要求。采用高效液相色譜-飛行時間高分辨質(zhì)譜法聯(lián)用技術(shù)進行樣品檢測,結(jié)合儀器自帶的Masshunter數(shù)據(jù)處理軟件基于精確質(zhì)量數(shù)數(shù)據(jù)庫完成多種脂溶性藻毒素篩查,可實現(xiàn)樣

6、品中多種脂溶性藻毒素的快速篩查和定性鑒別。將本研究建立的新方法用于對海水實際樣品和實驗室培養(yǎng)的藻體樣品中多種脂溶性藻毒素的篩查分析,最終從青島近岸海水中發(fā)現(xiàn)OA和PTX2,從利瑪原甲藻中發(fā)現(xiàn)OA、DTX1和AZA2,說明高效液相色譜-飛行時間高分辨質(zhì)譜法是進行海水和藻體中多種脂溶性毒素快速篩查的有效方法。
　　3.發(fā)展了高效液相色譜-多級質(zhì)譜法定量測定海水及藻體中4種典型脂溶性藻毒素,并對大孔吸附樹脂法富集海水中的OA和PTX2進

7、行了探討。所建立的檢測方法具有良好的靈敏度、重復(fù)性(RSD<25.00%)和回收率(56.25%~80.20%),能滿足實際海水和藻體樣品中4種典型脂溶性藻毒素的測定要求。對青島近岸海域8個采樣點海水樣品和4個南海海水樣品進行了測定,結(jié)果顯示青島近岸海域海水樣品中均存在不同濃度的OA和PTX2,濃度范圍分別為4.24ng/L~9.64ng/L和0.42ng/L~0.74ng/L,南海海水樣品中也檢出低于定量限濃度的OA和PTX2;對青島

8、近岸海域4個站點2012年10月到2013年3月間海水中OA和PTX2的濃度變化規(guī)律進行了研究,結(jié)果顯示兩種毒素具有不同的濃度變化趨勢,濃度波動范圍分別為2.24ng/L~11.19ng/L和0.10ng/L~0.74ng/L。利瑪原甲藻藻體樣品中測得含有濃度分別為21.6μg/g和304.4μg/g(濕重)的OA和DTX1。在優(yōu)化所得的大孔吸附樹脂法富集海水中OA和PTX2的最佳實驗條件下,海水中的OA和PTX2富集率分別可達65.9