液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在藥物降解產(chǎn)物及雜質(zhì)分析中的應(yīng)用.pdf

1、藥物的質(zhì)量與人類健康密切相關(guān)，藥物中降解產(chǎn)物及微量雜質(zhì)的鑒定分析也受到越來越多的重視。藥物中雜質(zhì)的存在會(huì)降低藥物的活性，影響藥物的穩(wěn)定性，甚至產(chǎn)生副作用和不良反應(yīng)，對(duì)人體健康產(chǎn)生危害，因此，對(duì)藥物中雜質(zhì)的控制是保證藥物質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。而對(duì)藥物降解產(chǎn)物進(jìn)行研究，不僅可以預(yù)測(cè)藥物的穩(wěn)定性，指導(dǎo)藥物的生產(chǎn)過程并選擇合適的包裝和貯藏條件，而且有助于建立藥物的降解途徑并對(duì)所建分析方法的可行性進(jìn)行驗(yàn)證。
　　拉科酰胺是一種新型的抗癲癇藥，常作

2、為輔助藥物用于治療成年患者的癲癇部分性發(fā)作，但有關(guān)拉科酰胺中雜質(zhì)及降解產(chǎn)物的研究?jī)H有1篇報(bào)道，仍有降解產(chǎn)物未被鑒定。氨芐西林鈉屬于半合成的β-內(nèi)酰胺類抗生素，主要用于抗感染的治療，前期研究發(fā)現(xiàn)氨芐西林鈉一些降解產(chǎn)物并不能根據(jù)已有雜質(zhì)對(duì)照品或相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行鑒定。因此，為更好地控制這些藥物的質(zhì)量，須建立有效的分析方法對(duì)其降解產(chǎn)物及未知雜質(zhì)進(jìn)行快速定性分析。
　　高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS)技術(shù)集液相色譜的高分離能力與質(zhì)譜

3、的強(qiáng)結(jié)構(gòu)解析能力于一體，已成為藥物雜質(zhì)分析的有力工具。本研究分別以拉科酰胺和氨芐西林鈉為研究對(duì)象，以HPLC-MS技術(shù)為分析手段，對(duì)拉科酰胺和氨芐西林鈉多種降解條件下的降解產(chǎn)物以及雜質(zhì)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)解析和推斷，并分析了其降解特征，期望為其質(zhì)量控制提供新的信息，也為藥物雜質(zhì)的研究提供新的手段。
　　第一部分拉科酰胺降解產(chǎn)物的HPLC-MS/MS分析
　　目的:采用高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)離子阱質(zhì)譜（HPLC-QTrap-MS）

4、和高效液相色譜串聯(lián)離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜(HPLC-IT-TOF-MS)技術(shù)對(duì)拉科酰胺樣品在酸、堿和氧化降解條件下的降解特征進(jìn)行研究，并對(duì)其降解產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析和推斷。
　　方法:將拉科酰胺樣品分別在酸（1 mol/L鹽酸）、堿（1 mol/L氫氧化鈉）和氧化(30％ H2O2)條件下進(jìn)行強(qiáng)降解，采用HPLC-QTrap-MS技術(shù)對(duì)其降解產(chǎn)物進(jìn)行分析，根據(jù)一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜信息對(duì)未知降解產(chǎn)物的分子量和可能分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行推斷;然后采用HPLC

5、-IT-TOF-MS技術(shù)對(duì)各降解樣品進(jìn)行分析，獲得降解產(chǎn)物及其碎片離子的準(zhǔn)確分子質(zhì)量數(shù)和可能分子組成，進(jìn)一步驗(yàn)證推斷結(jié)果。實(shí)驗(yàn)采用Agilent Zorbax SB-C18色譜柱(150mm×4.6 mm，5μm)進(jìn)行分離，梯度洗脫，流動(dòng)相為乙腈-2mmol/L乙酸銨（含0.1％甲酸），流速為0.8 mL/min。
　　結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)對(duì)拉科酰胺所有降解樣品中的7個(gè)降解產(chǎn)物進(jìn)行了分析，推斷出其中4個(gè)降解產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，并對(duì)其余降解產(chǎn)物進(jìn)行

6、了部分定性分析;4個(gè)降解產(chǎn)物分別鑒定為:(R)-2-氨基-N-苯基-3-甲氧基丙酰胺(m/z209)，2-乙?；?N-芐基丙烯酰胺(m/z219)，2-乙酰胺基-N-苯甲醇基-3-甲氧基丙酰胺(m/z267)和2-乙酰氨基-N-苯基-3-羥基丙酰胺(m/z237)。
　　結(jié)論:1本實(shí)驗(yàn)所用方法靈敏、有效，能夠?qū)⒗契０放c其降解產(chǎn)物完全分離;在所用質(zhì)譜條件下可獲得豐富、準(zhǔn)確的質(zhì)譜信息，從而快速對(duì)降解產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。2拉科酰胺在酸、

7、堿和氧化條件下均可發(fā)生不同程度的降解，其中化合物(R)-2-氨基-N-苯基-3-甲氧基丙酰胺（m/z209）為其主要降解產(chǎn)物。3化合物2-乙?；?N-芐基丙烯酰胺(m/z219)，2-乙酰胺基-N-苯甲醇基-3-甲氧基丙酰胺(m/z267)和2-乙酰氨基-N-苯基-3-羥基丙酰胺(m/z237)為首次報(bào)道。
　　第二部分氨芐西林鈉降解產(chǎn)物的HPLC-MS/MS分析
　　目的:采用HPLC-QTrap-MS技術(shù)和HPLC-Q-

8、TOF-MS（液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜）技術(shù)對(duì)氨芐西林鈉樣品在各種強(qiáng)降解條件下的降解特征進(jìn)行研究，并對(duì)其降解產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析和推斷。
　　方法:將氨芐西林鈉樣品分別在酸、堿、加熱、光照和高濕條件下進(jìn)行降解，聯(lián)合應(yīng)用HPLC-QTrap-MS技術(shù)的EMS-ER-IDA-EPI（增強(qiáng)全掃描-增強(qiáng)分辨率掃描-信息依賴-增強(qiáng)型子離子掃描）、PREC-ER-IDA-EPI(母離子掃描-增強(qiáng)分辨率掃描-信息依賴-增強(qiáng)型子離子掃描)和EP

9、I（增強(qiáng)型子離子掃描）三種掃描模式對(duì)降解樣品中的未知降解產(chǎn)物進(jìn)行分析，并根據(jù)獲得的質(zhì)譜信息對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行推斷;通過HPLC-Q-TOF-MS技術(shù)獲得各降解產(chǎn)物及其碎片離子的準(zhǔn)確分子質(zhì)量數(shù)和可能分子組成，進(jìn)一步驗(yàn)證推斷結(jié)果。實(shí)驗(yàn)采用Agilent Zorbax SB-C18（150mm×4.6 mm，5μm）色譜柱進(jìn)行分離，梯度洗脫，流動(dòng)相為乙腈-1 mmol/L乙酸銨溶液（加0.1％乙酸），流速為0.8 mL/min。
　　結(jié)果:本

10、實(shí)驗(yàn)對(duì)氨芐西林鈉樣品在各種降解條件下的19個(gè)雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定和定性分析，其中有4個(gè)降解產(chǎn)物未曾報(bào)道，為新鑒定化合物，分別為:(Z)-2-氧-2-（（（2-氧-3-苯基-2，3，6，7-四氫-1H-1，4-二氮雜卓-5-基）亞甲基）氨基-1-苯乙銨（m/z349），(E)-2-((（2-（2-氨基-2-苯乙酰胺基）-2-苯乙?；﹣啺被然┘谆?5，5-二甲基四氫噻唑-4-羧酸(m/z499)，(E)-1-羰基-N-((3，

11、6-二氧-5-苯基-1，6-二氫二氮雜苯-2(3H)-取代基）甲基）-2-巰基-2-甲基丙烷-1-胺(m/z348)和5-苯甲氨基-7-甲?；?2，2-二甲基-2，3-二氫咪唑并[5,1-b]噻唑-3-羧酸(m/z332)。
　　結(jié)論:1 HPLC-Q-TOF-MS方法靈敏度高、專屬性好、準(zhǔn)確度高，在未知雜質(zhì)定性方面可獲得更為豐富的結(jié)構(gòu)信息;本實(shí)驗(yàn)所建方法能夠?qū)逼S西林鈉與其降解產(chǎn)物很好的分離，并可快速、有效地對(duì)其降解產(chǎn)物進(jìn)行鑒定

12、和定性分析。2 HPLC-QTrap-MS中EMS-ER-IDA-EPI、PREC-ER-IDA-EPI和EPI模式的聯(lián)合應(yīng)用可有效地對(duì)藥物中未知雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。
　　第三部分氨芐西林鈉中雜質(zhì)的HPLC-MS/MS分析
　　目的:建立靈敏、有效的HPLC-QTrap-MS方法，對(duì)氨芐西林鈉樣品中的雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)和分析，并與國(guó)外市售氨芐西林鈉樣品進(jìn)行比較。
　　方法:應(yīng)用HPLC-QTrap-MS技術(shù)的增強(qiáng)全掃

13、描(EMS)模式分別對(duì)氨芐西林鈉及其國(guó)外市售樣品進(jìn)行分析:1通過與系統(tǒng)適用性對(duì)照品（包含氨芐西林，氨芐西林噻唑酸，二酮哌嗪氨芐西林，氨芐西林開環(huán)二聚體，氨芐西林閉環(huán)二聚體和氨芐西林開環(huán)三聚體）中的已知雜質(zhì)進(jìn)行色譜和質(zhì)譜信息的比較，從而對(duì)樣品中存在的這些雜質(zhì)進(jìn)行鑒定和確認(rèn);2對(duì)于樣品中的未知雜質(zhì)，可依據(jù)一級(jí)質(zhì)譜圖中的[M+H]+，[M+Na]+和[M+K]+離子峰來判斷其分子量，再結(jié)合質(zhì)譜圖中的碎片離子信息對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析和推斷，并對(duì)碎片

14、離子進(jìn)行歸屬。實(shí)驗(yàn)采用Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5μm)色譜柱進(jìn)行分離，梯度洗脫，流動(dòng)相為甲醇-乙酸水溶液(pH3.4)，流速為0.8 mL/min。
　　結(jié)果:1系統(tǒng)適用性對(duì)照品中的雜質(zhì)氨芐西林噻唑酸、二酮哌嗪氨芐西林、氨芐西林開環(huán)二聚體和氨芐西林閉環(huán)二聚體在氨芐西林鈉及其國(guó)外市售樣品中均可被檢測(cè)到;雜質(zhì)氨芐西林開環(huán)三聚體僅在國(guó)外市售樣品中被檢測(cè)到。2根據(jù)色譜峰的質(zhì)譜信息推斷出系統(tǒng)適用性對(duì)照品中未包含