高效液相色譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)血漿中幾種藥物的測(cè)定及分析應(yīng)用.pdf

1、高效液相色譜是20世紀(jì)60年代末期發(fā)展起來的一種新型分離分析技術(shù)。自問世以來,因其具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、化學(xué)工業(yè)及生化、醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域中。作為一種重要的分析技術(shù),質(zhì)譜不僅具有高靈敏度、高選擇性等特點(diǎn),也可分析未知物的結(jié)構(gòu),因此高效液相色譜法.質(zhì)譜聯(lián)用在藥物及其代謝產(chǎn)物研究、天然產(chǎn)物化學(xué)成分分析、殘留物分析、生物大分子分析及臨床診斷研究具有廣泛應(yīng)用。
　　 本文建立了高效液相色譜聯(lián)用技術(shù)研究血漿中

2、苯扎貝特、二羥丙茶堿及連翹苷的含量測(cè)定的新方法。論文由綜述和研究報(bào)告兩個(gè)部分組成,第一部分是綜述,在這部分中簡(jiǎn)單概述了高效液相色譜的特點(diǎn)、質(zhì)譜的組成及特點(diǎn)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)及其應(yīng)用、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在血漿中藥物分析的應(yīng)用。第二部分是研究報(bào)告,在這部分中建立了利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)血漿中苯扎貝特、連翹苷濃度進(jìn)行檢測(cè),在大鼠血漿和尿液中二羥丙茶堿濃度,同時(shí)研究了連翹苷和二羥丙茶堿在體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)。本文主要包括:大鼠血漿中苯

3、扎貝特的HPLC-MS法測(cè)定,HPLC法定量分析和測(cè)定在大鼠血漿和尿液中二羥丙茶堿濃度及其藥代動(dòng)力學(xué)特征,液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)定大鼠血漿中的連翹苷及其藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　 本論文共分為四章。
　　 第一章緒論
　　 緒論對(duì)高效液相色譜、質(zhì)譜及藥代動(dòng)力學(xué)及其應(yīng)用進(jìn)行了簡(jiǎn)單概述,并介紹了質(zhì)譜的結(jié)構(gòu)和特點(diǎn),高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物代謝和藥代動(dòng)力學(xué)的應(yīng)用和發(fā)展。
　　 第二章大鼠血漿中苯扎貝特的HPLC-MS

4、法測(cè)定
　　 建立一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS)測(cè)定大鼠血漿中苯扎貝特的方法。采用Gemini C18(150×4.6mm,5μm,Phenomenex,CA,USA)色譜柱;流動(dòng)相:乙腈/甲醇/水(0.03%甲酸水溶液,60:15:25,v/v/v);柱溫:35℃,流速為0.3 mL/min:紫外吸收波長(zhǎng)(UV)為235nm;進(jìn)樣量5μL。質(zhì)譜采用電噴霧電離(ESI)負(fù)離子模式,用于定量分析的離

5、子分別為[M-H]-m/z359.65→273.70(苯扎貝特)和[M-H]-m/z212.95→127.08(氯貝酸)。對(duì)苯扎貝特檢測(cè)的線性范圍為0.073μg/mL-7.884μg/mL,r=0.9995。得到苯扎貝特的平均回收率為94.3%-103.1%;方法的日內(nèi)和日間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于6%;最低檢測(cè)限(LOD)與定量限(LOQ)分別為9.0 ng/mL和30ng/mL;該方法重現(xiàn)性好,靈敏度高,為臨床上檢測(cè)人體血漿

6、中苯扎貝特的濃度提供了一種可靠的分析手段。
　　 第三章液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)定大鼠血漿的連翹苷及其藥代動(dòng)力學(xué)應(yīng)用
　　 建立了一種簡(jiǎn)便、靈敏、有效的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定大鼠漿中的連翹苷檢測(cè)的新方法,并研究了該藥物在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。采用乙腈沉淀蛋白質(zhì)處理血漿樣品,處理后的樣品經(jīng)Gemini-C18 column(150×4.6mm,5 m,Phenomenex,CA,USA)分離,流動(dòng)相為A(0.05%乙酸水溶液

7、):B(乙腈)體積比為44:56(v/v),流速為0.3mL/min,進(jìn)樣量:5μL,柱溫:30℃,連翹苷和內(nèi)標(biāo)利血平在ESI正離子模式質(zhì)譜條件下,主要生成[M+Na+]m/z554.85(連翹苷)和[M+H+]m/z609.29(利血平)準(zhǔn)分子離子峰。血漿中連翹苷的線性范圍為0.069～8.97μg/mL;檢測(cè)限(S/N=3,進(jìn)樣量為5μL)為7.04 ng/mL;血漿中三種濃度大小連翹苷的平均回收率為97.7%,96.3%和100.

8、1%:日內(nèi)、日間RSD均小于7.O%.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法簡(jiǎn)便可行,重現(xiàn)性好,靈敏度高,精密度高,可以用于連翹苷血藥濃度測(cè)定和藥動(dòng)學(xué)研究。
　　 第四章HPLC法定量分析和測(cè)定在大鼠血漿和尿液中二羥丙茶堿濃度及其藥代動(dòng)力學(xué)特征
　　 建立了一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏的高效液相色譜法測(cè)定大鼠的血漿和尿液中二羥丙茶堿濃度方法,并對(duì)其藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。采用Luna NH2(25×4.6 mm,5μm,Phenomenex,CA,US

9、A)色譜柱,流動(dòng)相:乙腈:水(0.01%乙酸水溶液,80:20,v/v),柱溫:35℃,流速為0.3mL/min,紫外吸收波長(zhǎng)(UV)為273 nm,進(jìn)樣量20μL。對(duì)二羥丙茶堿在尿液和血漿里檢測(cè)的線性范圍為0.088μg/mL-46.62μg/mL,在尿液中得到的二羥丙茶堿的平均回收率為99.14%-101.15%,在血漿中得到的二羥丙茶堿的平均回收率為98.61%-99.18%,方法的日內(nèi)和日間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于1.96