低劑量微波輻射誘導(dǎo)博來(lái)霉素致小鼠DNA損傷的適應(yīng)性反應(yīng)研究.pdf

1、目的：以ICR小鼠為動(dòng)物模型,觀察低劑量微波對(duì)博來(lái)霉素(Bleomycin,BLM)致小鼠DNA損傷的影響,探討微波輻射誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)能力增強(qiáng)和抗氧化應(yīng)激損傷在微波輻射誘導(dǎo)適應(yīng)性反應(yīng)中的作用。
　　方法：⑴小鼠外周血有核細(xì)胞DNA損傷的單細(xì)胞凝膠電泳分析雄性ICR小鼠48只,經(jīng)過(guò)7天的適應(yīng)飼養(yǎng)后隨機(jī)分為以下6組:對(duì)照組、微波組(900MHz,120μW/cm2的微波照射4h/d,7d)、假照射組(與微波組小鼠放置在相同的輻照

2、裝置中,除了不進(jìn)行微波照射外,其他條件相同,4h/d,7d)、博來(lái)霉素組(腹腔注射BLM,18.5mg/kg體重)、微波與博來(lái)霉素復(fù)合組(900MHz,120μW/cm2的微波照射4h/d,7d,微波照射結(jié)束后4h給予18.5mg/kg體重BLM,腹腔注射,下文簡(jiǎn)稱微波復(fù)合組)和假照射與博來(lái)霉素復(fù)合組(假照射4h/d,7d,假照射結(jié)束后4h給予18.5mg/kg體重 BLM,腹腔注射,下文簡(jiǎn)稱假照射復(fù)合組)。小鼠于給藥后20min取血進(jìn)

3、行單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn),測(cè)定外周血有核細(xì)胞彗星尾長(zhǎng)(Tail Length, TL)和尾距(Tail Moment, TM)。⑵小鼠血清及肝、肺組織8-OHdG的檢測(cè)動(dòng)物分組及處理方法同上,小鼠于給藥后72小時(shí)收集血清及肝、肺組織,勻漿,用試劑盒測(cè)定8-OHdG水平。⑶雄性ICR小鼠48只,經(jīng)過(guò)7天的適應(yīng)飼養(yǎng)后隨機(jī)分為以下6組:對(duì)照組、微波組(900MHz,120μW/cm2的微波輻照4h/d,7d)、假照射組(與微波組小鼠放置在相同的輻

4、照裝置中,不進(jìn)行微波輻照,4h/d,7d)、博來(lái)霉素組(腹腔注射BLM,18.5mg/kg體重)、微波復(fù)合組(900MHz,120μW/cm2的微波輻射4h/d,7d,輻照結(jié)束后4h給予18.5mg/kg體重BLM,腹腔注射)和假照射復(fù)合組(假照射4h/d,7d,假照射結(jié)束后4h給予18.5mg/kg體重BLM,腹腔注射)。所有動(dòng)物于BLM給藥20min后采血,對(duì)照組、假照射組和微波組立即進(jìn)行單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn),測(cè)定外周血有核細(xì)胞彗星尾

5、長(zhǎng)和尾距;將博來(lái)霉素組、微波復(fù)合組及假照射復(fù)合組動(dòng)物的血樣分成6份,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中,分別于采血后0min、30min、60min、90min、120min和150min進(jìn)行堿性單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)。通過(guò)比較給藥后各組外周血有核細(xì)胞DNA損傷降低的程度及速度,分析微波輻射誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)能力提高在適應(yīng)性反應(yīng)中的作用。⑷小鼠血清氧化應(yīng)激水平指標(biāo)的檢測(cè)雄性ICR小鼠48只,經(jīng)過(guò)7天的適應(yīng)飼養(yǎng)后隨機(jī)分為以下6組:對(duì)照組、微波組(900

6、MHz,120μW/cm2的微波輻照4h/d,7d)、假照射組(與微波組小鼠放置在相同的輻照裝置中,不進(jìn)行微波輻照,4h/d,7d)、博來(lái)霉素組(腹腔注射BLM,18.5mg/kg體重)、微波復(fù)合組(900MHz,120μW/cm2的微波輻射4h/d,7d,微波輻照結(jié)束后4h給予18.5mg/kg體重BLM,腹腔注射)和假照射復(fù)合組(假照射4h/d,7d,假照射結(jié)束后4h給予18.5mg/kg體重BLM,腹腔注射)。小鼠于BLM給藥后2

7、h取血清,檢測(cè)NO、MDA含量及SOD活力。⑸小鼠肝、肺組織氧化應(yīng)激水平指標(biāo)的檢測(cè)動(dòng)物分組及處理方法同上。小鼠于BLM給藥后0.5h收集肝、肺組織,制備勻漿液,檢測(cè)肝、肺組織中NO、MDA含量及SOD活力。
　　結(jié)果：①與對(duì)照組相比,假照射組小鼠外周血有核細(xì)胞彗星 TL及 TM、血清及肝、肺組織中8-OHdG濃度均無(wú)顯著差異;與假照射復(fù)合組相比,BLM組小鼠外周血有核細(xì)胞彗星TL及TM、血清及肝、肺組織中8-OHdG濃度均無(wú)顯著差

8、異,說(shuō)明微波假照射對(duì)DNA損傷無(wú)明顯影響。②與對(duì)照組相比,微波組小鼠外周血有核細(xì)胞彗星 TL及TM、血清及肝組織中8-OHdG濃度均無(wú)明顯變化,僅肺組織中8-OhdG濃度明顯升高;BLM組小鼠外周血有核細(xì)胞彗星 TL及TM、血清及肝、肺組織中8-OHdG濃度均顯著升高(P<0.05),說(shuō)明低劑量微波輻射本身不會(huì)產(chǎn)生明顯的DNA損傷,BLM暴露可導(dǎo)致明顯的DNA損傷。③與單純BLM組相比,微波復(fù)合組小鼠外周血有核細(xì)胞彗星 TL及 TM、血

9、清及肝、肺組織中8-OHdG濃度均明顯降低(P<0.01),說(shuō)明低劑量微波輻射能夠拮抗BLM暴露導(dǎo)致的DNA損傷。④與對(duì)照組相比,假照射組和微波組小鼠外周血有核細(xì)胞彗星 TL及TM均無(wú)顯著差異,說(shuō)明假照射和低劑量微波照射本身不會(huì)產(chǎn)生明顯的DNA損傷。各時(shí)點(diǎn)BLM組彗星 TL及TM與該時(shí)點(diǎn)假照射復(fù)合組相比均無(wú)顯著差異,說(shuō)明微波假照射對(duì)DNA損傷修復(fù)沒(méi)有明顯影響。⑤采血后0min進(jìn)行的單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與對(duì)照組相比,BLM組、假照射復(fù)

10、合組、微波復(fù)合組彗星 TL及TM均升高。微波復(fù)合組彗星 TL及TM在各時(shí)點(diǎn)均顯著低于BLM組(P<0.01)。BLM組、微波復(fù)合組和假照射復(fù)合組彗星TL及TM均隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸減小,但微波復(fù)合組小鼠彗星TL及TM降低較快,150min后降低至對(duì)照組水平,而B(niǎo)LM組降低較慢,150min后小鼠彗星 TL及TM仍顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)果說(shuō)明微波復(fù)合組小鼠DNA損傷修復(fù)能力比BLM組強(qiáng)。⑥與對(duì)照組相比,假照射組小鼠血清及肝肺組織中N

11、O、SOD活力及MDA含量均無(wú)顯著差異;與假照射復(fù)合組相比,BLM組小鼠血清及肝、肺組織中NO、SOD活力及MDA含量均無(wú)顯著差異。說(shuō)明微波假照射對(duì)小鼠氧化應(yīng)激水平無(wú)明顯影響。與對(duì)照組相比,微波組小鼠血清及肝、肺組織中NO、SOD活力及MDA含量均無(wú)明顯變化。BLM組小鼠肝、肺組織中NO水平明顯升高(P<0.05),血清及肝、肺組織中SOD活力明顯降低(P<0.05)、MDA含量顯著升高(P<0.05),說(shuō)明低劑量微波輻射本身不會(huì)對(duì)小鼠

12、氧化應(yīng)激水平產(chǎn)生明顯影響,而B(niǎo)LM暴露可導(dǎo)致小鼠氧化應(yīng)激水平明顯提高。⑦與單純 BLM組相比,微波復(fù)合組小鼠肝、肺組織中NO水平明顯降低(P<0.05),肺組織中SOD活力顯著升高(P<0.05),血清和肝組織中MDA含量明顯降低(P<0.05),說(shuō)明預(yù)先微波暴露能夠拮抗BLM暴露導(dǎo)致的氧化損傷。
　　結(jié)論：⑴預(yù)先給予120μW/cm2低劑量微波能夠誘導(dǎo)小鼠適應(yīng)性反應(yīng),減輕博來(lái)霉素致小鼠外周血有核細(xì)胞和肝、肺組織DNA損傷。⑵預(yù)先