PARP-1及其相關(guān)因子在低劑量甲醛誘導(dǎo)的毒物興奮效應(yīng)及適應(yīng)性反應(yīng)中的表達改變.pdf

1、　 本研究以甲醛為研究對象，MTT法建立適應(yīng)性反應(yīng)模型并用流式細胞術(shù)驗證后，用實時熒光定量PCR法檢測不同劑量毒物刺激及適應(yīng)性反應(yīng)過程中PARP-1與其相關(guān)因子DNA-PK、ATM、P53、NF-кB的表達改變，驗證PARP-1被低劑量毒物激活，促進斷裂DNA的修復(fù)，從而使細胞對繼后大劑量毒物攻擊產(chǎn)生耐受的機制，初步探討PARP-1與其相關(guān)因子在適應(yīng)性反應(yīng)過程中的可能聯(lián)系，為研究PARP-1在低劑量ECPs接觸時參與應(yīng)激/適應(yīng)過程的細

2、胞與分子機制提供理論依據(jù)。 材料和方法:1.MTT法測定細胞增殖功能，建立適應(yīng)模型，確定實驗分組：采用噻唑藍顏色反應(yīng)法(MTT法)略為改進。做出甲醛誘導(dǎo)人胚肺成纖維細胞MRC-5毒性的劑量-反應(yīng)關(guān)系曲線，選用無毒性濃度作為預(yù)處理劑量(D1)，IC50左右的濃度作為攻擊劑量(D2)，建立低劑量甲醛誘導(dǎo)MRC-5細胞產(chǎn)生的適應(yīng)性反應(yīng)模型。另外，在低劑量甲醛預(yù)處理后加入PARP-1抑制劑PJ34(5μM)，看其是否抑制MRC-5細胞對

3、高劑量甲醛致DNA斷裂的適應(yīng)現(xiàn)象。最后確定實驗分組為：對照組、D1組、D2組、D1+D2組、D1+PJ34組、D1+PJ34+D2組。2.流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡，同時驗證所建立的適應(yīng)模型：培養(yǎng)MRC-5至對數(shù)生長期，按所建立的適應(yīng)模型分組處理后，2.5mg/L胰蛋白酶消化收集各組細胞，用AnnexinVFITC/PI復(fù)染，流式細胞術(shù)檢測細胞變化情況，驗證MTT法所建立的適應(yīng)模型。3.RealtimeRT-PCR檢測各組細胞中PARP-1