滅活草分支桿菌霧化吸入對(duì)支氣管哮喘氣道炎癥和Vγ1+、Vγ4+γδT細(xì)胞亞群的影響.pdf

1、第一部分霧化吸入滅活草分支桿菌減輕哮喘小鼠氣道炎癥及對(duì)細(xì)胞因子IL-4、IL-10、IFN-γ的影響
　　目的:探討霧化吸入滅活草分支桿菌對(duì)支氣管哮喘小鼠氣道炎癥及肺組織細(xì)胞因子分泌的影響。
　　方法:將50只雄性Balb/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組:正常對(duì)照組(A)、哮喘模型組(B0、B3、B4、B5)、治療組(C0、C3、C4、C5)、預(yù)防組(D)。用卵清蛋白(OVA)致敏和激發(fā)制成小鼠支氣管哮喘模型。C組在卵蛋白激發(fā)

2、后給予霧化吸入草分枝桿菌治療，一天一次，C3、C4、C5分別治療3天、4天、5天，D組在每次OVA激發(fā)前給予草分枝桿菌霧化吸入，一天一次。各組動(dòng)物處死后提取肺組織和支氣管肺泡灌洗液(BALF)。肺組織進(jìn)行病理HE染色、AB-PAS染色觀察支氣管肺炎癥和氣道粘液分泌情況，并行病理半定量分析。BALF離心后行炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù);酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)BALF上清液中IL-4、IL-10、IFN-γ水平。采用SPSS17.0軟件

3、統(tǒng)計(jì)分析，多組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD法，病理半定量結(jié)果采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:BALF中IL-4值治療4天組（15.35±3.53）、5天組（14.48±4.21）、預(yù)防組(14.60±2.89)，分別較同期模型組（分別是28.41±4.45，30.52±3.57，26.81±3.59）減少(P＜0.01)，IL-10值治療4天組（70.00±6.28）、5天組（70.72±5.40）、預(yù)防組（7

4、1.36±6.46）較同期模型組（分別是46.53±4.41，45.47±4.14，47.68±4.47）增加(P＜0.01)，IFN-γ值治療4天組（243.80±58.78）、5天組（248.40±62.53）、預(yù)防組（259.00±43.29）較同期模型組（分別是166.20±54.25，157.20±51.74，175.20±55.35）增加（P＜0.05），BALF中嗜酸性粒細(xì)胞比例低于模型組，治療5天組、預(yù)防組氣道炎癥病變均

5、較模型組減輕，病理半定量結(jié)果差異有顯著性(P＜0.05）。
　　結(jié)論:霧化吸入草分枝桿菌能減輕支氣管哮喘小鼠氣道炎癥，其效應(yīng)與調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌有關(guān)。
　　第二部分滅活草分支桿菌霧化吸入對(duì)支氣管哮喘小鼠γδT細(xì)胞功能和Vγl+，Vγ4+γδT細(xì)胞亞群的影響
　　目的：觀察霧化吸入滅活草分枝桿菌對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥和γδT細(xì)胞功能的影響，探討草分枝桿菌治療哮喘與γδT細(xì)胞分泌細(xì)胞因子和Vγl+，Vγ4+γδT細(xì)胞亞群的關(guān)系。

6、
　　方法：雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為3組，每組6只，分別為:空白對(duì)照組(A)，哮喘模型組(B)，治療組?。OVA致敏激發(fā)制備支氣管哮喘模型，C組予以草分枝桿菌霧化吸入治療5天。治療結(jié)束24小時(shí)內(nèi)處死小鼠，收集肺組織標(biāo)本。病理HE染色觀察肺部及氣道炎癥狀況。免疫組化染色檢測(cè)肺內(nèi)協(xié)TCR表達(dá)以了解肺內(nèi)協(xié)T細(xì)胞分布。流式細(xì)胞學(xué)檢協(xié)T細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子IL-10和IFN-y。熒光定量PCR檢測(cè)肺內(nèi)Vγl mRNA，Vγ4 mRNA表達(dá)量

7、。
　　結(jié)果：治療組小鼠氣道炎癥較模型組明顯減輕;IL-lO+γδT細(xì)胞，IFN-γδT細(xì)胞比模型組增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);治療組小鼠肺組織Vγ4 mRNA表達(dá)量較模型組增加，Vγ1 mRNA表達(dá)量較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：霧化吸入滅活草分枝桿菌能調(diào)節(jié)γδT細(xì)胞功能和Vγl+,Vγ4+γδT細(xì)胞亞群數(shù)量，其減輕哮喘氣道炎癥的作用可能與調(diào)析γδT細(xì)胞功能和亞群比例有關(guān)。
　　

8、第三部分霧化吸入滅活草分支桿菌減輕哮喘小鼠氣道炎癥及對(duì)TOLL樣受體2表達(dá)的影響
　　目的:研究霧化吸入滅活草分支桿菌對(duì)支氣管哮喘小鼠氣道炎癥及肺組織細(xì)胞因子分泌的影響，探討TOLL樣受體2(TLR2)表達(dá)在霧化吸入滅活草分支桿菌防治支氣管哮喘中的作用。
　　方法:將24只雄性Balb/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，每組8只:正常對(duì)照組(A)、哮喘模型組(B)、干預(yù)組?。卵清蛋白(OVA)致敏制成小鼠支氣管哮喘模型。C組在每

9、次卵蛋白激發(fā)前給予霧化吸入草分枝桿菌治療，一天一次。各組動(dòng)物處死后提取肺組織和支氣管肺泡灌洗液((BALF)。進(jìn)行病理HE染色、一AB-PAS染色觀察支氣管肺炎癥和氣道粘液分泌情況，并行半定量分析。BALF中炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)，檢測(cè)BALF中IL-4，IL-10，IFN-γ水平。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)肺組織TLR2 mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：干預(yù)組BALF中IL-4分泌減少，IL-10，IFN-γ增加(P＜0.05)，BALE中嗜酸性粒