HIF-1α基因miR-199a靶序列區(qū)單核苷酸多態(tài)與胰腺癌發(fā)病預(yù)后關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的：
　　 胰腺癌是目前已知的惡性度最高、預(yù)后最差的實(shí)體瘤。盡管包括手術(shù)和放化療在內(nèi)的治療手段取得了明顯的進(jìn)展，但胰腺癌的預(yù)后并未獲得明顯改善，五年的存活率只有3％左右。乏氧是實(shí)體腫瘤普遍的生長微環(huán)境，乏氧狀態(tài)下腫瘤進(jìn)展較快是臨床治療中所面臨的難題。低氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxiainduciblefactor1，HIF-1)是參與腫瘤乏氧的一個(gè)重要的調(diào)控因子，由α亞單位和β亞單位構(gòu)成的異源二聚體，轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)，參與細(xì)胞增殖、

2、糖代謝、細(xì)胞存活等多種生理功能。臨床病理學(xué)資料顯示，約70％胰腺導(dǎo)管腺癌組織高表達(dá)HIF-1。最近研究報(bào)道了HIF-1α序列中rs2057482基因多態(tài)性影響腎細(xì)胞癌的預(yù)后，并且通過影響Wnt信號通路參與結(jié)腸癌的遺傳易感。但其與胰腺癌的關(guān)系尚未有人報(bào)道。而近年來，HIF-1α在胰腺癌的形成、進(jìn)展過程中發(fā)揮的作用引起了廣泛關(guān)注，本研究旨在探討HIF-1α基因多態(tài)性和胰腺癌發(fā)病預(yù)后的關(guān)系，以及HIF-1α基因多態(tài)性在miRNA調(diào)控HIF-1

3、α中的作用，為胰腺癌患者的早期診斷和治療提供新的途徑和靶點(diǎn)。
　　 方法：
　　 1.樣本的納入及采集
　　 采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例-對照研究方法，以291例胰腺癌患者和247例正常對照為研究對象。病例組為2001年至2012年在天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院住院的經(jīng)細(xì)胞學(xué)證實(shí)為胰腺癌的患者;對照為同時(shí)期在天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院進(jìn)行體檢的247位正常居民。
　　 2.目的基因的采集、擴(kuò)增、測序及免疫組化

4、>　　 采集病例和正常對照人群的靜脈血及部分病例組石蠟組織，DNA的抽提采用DNA提取試劑盒。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和基因測序技術(shù)對各樣本rs2057482多態(tài)位點(diǎn)基因型進(jìn)行鑒定。并收集150例胰腺癌石蠟組織切片，用免疫組織化學(xué)方法分析rs2057482位點(diǎn)基因型分布與HIF-1α基因表達(dá)的相關(guān)性。
　　 3.細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
　　 miR-199a靶序列的3'非翻譯區(qū)野生型和突變型熒光素酶報(bào)告基因載體，與miR

5、-199amimic/mimiccontrol共轉(zhuǎn)染HEK-293T和胰腺癌細(xì)胞系，檢測兩種載體中熒光素酶的表達(dá)差異。
　　 4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
　　 研究對象基因型與Hardy-Weinberg平衡的符合程度、組間基因型與等位基因頻率的比較采用雙側(cè)）x2檢驗(yàn)，采用非條件Logistic回歸模型對胰腺癌的危險(xiǎn)因素進(jìn)行單因素和多因素分析，估計(jì)比值比(OR)及其95％置信區(qū)間(CI)。用Kaplan-Meier方法進(jìn)行生存分析，不

6、同基因型之間生存率差異通過log-rank檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.HIF-1α基因中rs2057482位點(diǎn)的CC基因型頻率病例組顯著高于對照組(73.5％vs61.9％，P＜0.01)。logistic回歸分析結(jié)果顯示:CC基因型可增加胰腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.156,95％CI:1.324-3.511,P＜0.05)。
　　 2.Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)124例胰腺癌中CC基因型患者生存時(shí)

7、間（14.0±2.1月）明顯低于CT基因型患者（25.2±6.3月，P=0.01）。臨床病理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與該SNP位點(diǎn)的改變相關(guān)。
　　 3.雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-199a靶向結(jié)合于HIF-1α3'UTR區(qū)，且與CC基因型相比，miR-199a顯著下調(diào)CT基因型的熒光素酶活性(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 HIF-1α基因miR-199a靶序列區(qū)基因多態(tài)性和胰腺癌易感性和預(yù)后密切相關(guān)，為胰