核糖核苷酸還原酶M1亞單位基因單核苷酸多態(tài)性與胰腺癌吉西他濱化療敏感性的關(guān)系.pdf

1、背景
　　胰腺癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，其發(fā)病隱匿、進(jìn)展迅速、治療效果及預(yù)后極差，居全球癌癥死因第5位。吉西他濱是胰腺癌治療的一線化療藥物，但由于患者的個(gè)體間差異及耐藥性，常導(dǎo)致治療效果不佳。
　　核糖核苷酸還原酶M1亞單位（ribonucleotidereductaselargesubunit1，RRM1）是核糖核苷酸還原酶(ribonucleotidereductase，RR)的催化亞基，是吉西他濱的主要作用位點(diǎn)。已有多

2、個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)患者對(duì)吉西他濱的反應(yīng)隨著RRM1表達(dá)水平的升高而下降。單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）是人類基因組中最豐富的遺傳變異，指基因組DNA序列中頻率大于1％的單個(gè)核苷酸的變異。現(xiàn)已證實(shí)RRM1基因SNP可能改變代謝酶活性與產(chǎn)量，導(dǎo)致患者對(duì)吉西他濱的不同反應(yīng)。隨著人類基因組研究(HumanGenomeProject,HGP)的完成和國(guó)際人類基因組單體型圖計(jì)劃(International

3、HapMapProject，HapMap)的進(jìn)展，利用SNP預(yù)測(cè)患者預(yù)后的研究已切實(shí)可行。
　　第一部分RRM1基因多態(tài)性與胰腺癌根治術(shù)后吉西他濱化療患者預(yù)后關(guān)系的臨床研究
　　方法
　　研究對(duì)象包括35例成功隨訪的經(jīng)病理組織學(xué)確診的胰腺癌病例和38例按性別和年齡與病例進(jìn)行頻數(shù)匹配的健康人群對(duì)照。探討RRM1基因多態(tài)性改變與胰腺癌預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)。采用功能SNP的選點(diǎn)策略，共選擇了RRM1基因四個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)(rs1042

4、858A＞G、rs183484G＞T和rs9937A＞G、rs11030918T＞C)，采用高通量技術(shù)進(jìn)行基因型檢測(cè)，采用SPSS18.0軟件行Kaplan-Meier方法繪制生存曲線并以Log-rank檢驗(yàn)生存時(shí)間之間的差異。單因素和多因素Cox回歸計(jì)算相對(duì)危險(xiǎn)度(RelativeRatios,RR)。
　　結(jié)果
　　rs183484GG基因型患者的中位生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于GT/TT型患者(log-rankp=0.028)。單

5、因素回歸分析結(jié)果顯示，與rs183484GG基因型攜帶者相比，GT/TT基因型患者死亡風(fēng)險(xiǎn)顯著提高3.03倍(RR=0.303，95％CI=0.10-0.93，P=0.037)。進(jìn)一步進(jìn)行多因素調(diào)整后，GG基因型仍具有較好的預(yù)后效應(yīng)(調(diào)整RR=0.254，95％CI=0.08-0.83)。以上結(jié)果說明rs183484GG基因型是術(shù)后吉西他濱化療胰腺癌患者良好預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。分層分析表明在男性及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，rs183484位點(diǎn)

6、的多態(tài)性改變與胰腺癌患者的預(yù)后之間也存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(調(diào)整RR=0.282，95％CI=0.032-1.04;調(diào)整RR=0.317，95％CI=0.14-1.004)。研究還發(fā)現(xiàn)rs9937位點(diǎn)AA基因型患者的生存時(shí)間長(zhǎng)于AG/GG基因型患者，但差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性水平(log-rankP=0.066，RR=0.543，95％CI=0.17-1.77，P=0.311)。rs183484與rs9937位點(diǎn)的聯(lián)合分析結(jié)果表明，死亡風(fēng)險(xiǎn)

7、隨著攜帶預(yù)后不良基因型個(gè)數(shù)的增加而增加，攜帶兩個(gè)預(yù)后不良基因患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)約為未攜帶預(yù)后不良基因型的患者的2.29倍(RR=2.288，95％CI=0.942-5.558，P=0.068)。
　　結(jié)論
　　RRM1基因多態(tài)性改變與胰腺癌根治術(shù)后吉西他濱化療患者的預(yù)后有關(guān)，rs183484GG基因型是術(shù)后吉西他濱化療胰腺癌患者良好預(yù)后的預(yù)測(cè)因素。這可能與該基因影響化療藥物介導(dǎo)的DNA損傷后修復(fù)有關(guān)。
　　第二部分RRM1

8、基因多態(tài)性在各胰腺癌細(xì)胞株中的分析及與其mRNA表達(dá)關(guān)系的研究
　　方法
　　本研究使用人胰腺癌細(xì)胞株Aspc、Bxpc、SU86.86、SW1990、T3M4、Mia、PCT，利用KingFisherDuo磁珠純化系統(tǒng)提取細(xì)胞株DNA，PCR擴(kuò)增目的片段后使用ABI3730XL基因分析儀進(jìn)行RRM1基因多態(tài)性分析。同時(shí)使用KingFisherDuo磁珠純化系統(tǒng)提取細(xì)胞株RNA，采用SYBRGreen熒光染料法qRT-PCR