胰腺癌脫氧胞苷激酶基因多態(tài)性及蛋白表達與吉西他濱化療敏感性的相關(guān)性探討.pdf

1、胰腺癌是一種進展迅速的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,5年存活率低于5％,手術(shù)切除率僅15％～20％。因此化療在胰腺癌的治療中具有極為重要的地位。吉西他濱是胰腺癌臨床治療的一線化療藥物,但由于患者對化療反應(yīng)存在個體化差異,故其臨床療效并不令人滿意。
　　 脫氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,dCK)是吉西他濱等核苷類藥物體內(nèi)代謝過程中的關(guān)鍵酶,其活性直接影響到上述藥物的化療療效。單核苷酸多態(tài)性(Single-nucleot

2、ide polymorphism,SNP)是指基因組DNA序列中頻率大于1％的單個核苷酸的變異。位于基因非編碼區(qū)和編碼區(qū)的SNP可分別影響基因的表達和編碼蛋白的合成,最終影響蛋白的活性和功能?，F(xiàn)已證實化療藥物代謝酶基因的SNP改變是導(dǎo)致患者對化療藥物不同反應(yīng)的原因之一。近年來,有學(xué)者發(fā)現(xiàn)dCK基因多態(tài)性及蛋白表達水平與核苷類藥物的化療敏感性密切相關(guān)。
　　 因此,本研究設(shè)計從不同來源人胰腺癌細胞株水平分析dCK基因多態(tài)性及蛋白表

3、達與吉西他濱化療敏感性間的關(guān)系,繼而在胰腺癌臨床患者中進行驗證。以期建立通過dCK基因多態(tài)性及蛋白表達檢測預(yù)測吉西他濱化療療效的方法,為胰腺癌患者的個體化化療提供有效的預(yù)測指標。
　　 研究目的:
　　 1.探討胰腺癌細胞dCK基因多態(tài)性與吉西他濱化療敏感性之間的關(guān)系；
　　 2.探討胰腺癌細胞dCK蛋白表達水平與吉西他濱化療敏感性之間的關(guān)系；
　　 3.探討通過對胰腺癌患者dCK基因多態(tài)性及蛋白表達檢測

4、預(yù)測吉西他濱化療療效的可行性。
　　 實驗方法:
　　 第一部分,利用DNA提取試劑盒(QIAamp DNA minikits)提取6種人胰腺癌細胞株AsPC-1,BxPC-3,Mia PaCa2,SU86.86,SW1990,T3M4細胞的全DNA標本,PCR擴增目的片段后使用ABI3730XL基因分析儀進行dCK基因多態(tài)性檢測；同時使用Cell Counting Kit-8(CCK-8)試劑對上述細胞進行吉西他濱化療

5、敏感性檢測,分析胰腺癌細胞dCK基因多態(tài)性與吉西他濱化療敏感性間的關(guān)系；
　　 第二部分,在第一部分工作的基礎(chǔ)上,各選取吉西他濱化療敏感性不同的兩組人胰腺癌細胞株(敏感組:BxPC-3,T3M4；不敏感組:AsPC-1,SW1990),進行dCK蛋白表達western blot檢測并比較其差異；轉(zhuǎn)染dCK-siRNA下調(diào)BxPC-3和T3M4細胞中dCK蛋白表達后,使用CCK-8試劑進行吉西他濱化療敏感性檢測,分析胰腺癌細胞dC

6、K蛋白表達與胰腺癌吉西他濱化療敏感性間的關(guān)系；
　　 第三部分,對30例吉西他濱化療的胰腺癌患者外周血細胞DNA標本進行dCK基因多態(tài)性檢測,分析胰腺癌患者dCK基因多態(tài)性與吉西他濱化療預(yù)后的關(guān)系；對43例吉西他濱化療的胰腺癌患者腫瘤組織標本進行dCK蛋白免疫組化檢測,分析胰腺癌患者dCK蛋白表達與吉西他濱化療預(yù)后的關(guān)系。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.在AsPC-1,BxPC-3,Mia PaCa2,SU86.8

7、6,SW1990,T3M4細胞中,檢測到dCK基因A9846G和C300T兩個SNP位點的基因型突變。CCK-8藥敏檢測顯示:9846AG基因型細胞(BxPC-3,T3M4)較9846GG基因型細胞(AsPC-1,MiaPaCa2,SU86.86,SW1990)對吉西他濱化療的反應(yīng)更為敏感(P<0.01),300CT基因型細胞與300CC基因型細胞相比,吉西他濱化療敏感性無顯著性差異(P>0.01)；
　　 2.在AsPC-1,

8、BxPC-3,SW1990,T3M4細胞中,dCK蛋白高表達組(BxPC-3和T3M4)較低表達組(AsPC-1和SW1990)的吉西他濱化療敏感性更高(P<0.01)。使用dCK-siRNA下調(diào)BxPC-3和T3M4細胞中dCK蛋白表達后,BxPC-3和T3M4細胞的吉西他濱化療敏感性明顯下降(P<0.05)；
　　 3.30例胰腺癌患者中,dCK基因9846AA/AG基因型攜帶者較9846GG基因型攜帶者對吉西他濱化療有更好

9、的反應(yīng)(P=0.057)；
　　 4.43例胰腺癌患者中,腫瘤組織dCK蛋白表達水平與患者的吉西他濱化療預(yù)后呈正相關(guān)(P<0.05),與年齡呈負相關(guān)(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.胰腺癌細胞dCK基因A9846G SNP位點的基因型與吉西他濱化療敏感性密切相關(guān)；
　　 2.胰腺癌細胞dCK蛋白表達水平與吉西他濱化療敏感性呈正相關(guān)；
　　 3.通過檢測胰腺癌患者外周血細胞dCK基因多態(tài)性