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文檔簡介
1、【目的】 DNA修復(fù)基因XPD751的基因多態(tài)性可能與核苷酸切除修復(fù)功能改變有關(guān)，從而影響鉑類藥物抗腫瘤的作用，本實(shí)驗(yàn)用多聚酶鏈反應(yīng)--限制性片段長度多態(tài)性分析技術(shù)檢測XPD751基因型，來研究DNA修復(fù)基因XPD751基因多態(tài)性與肺癌化療敏感性的關(guān)系，以更好的指導(dǎo)臨床個(gè)體化用藥。 【方法】 收集經(jīng)病理學(xué)確診的肺癌234例，所有患者均經(jīng)鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療方案治療。所有病例化療前抽靜脈血，提取白細(xì)胞DNA，用多聚
2、酶鏈反應(yīng)--限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析技術(shù)檢測XPD751基因型。XPD751檢測所用引物為上游：5’-CCTCTCCCTTTCCTCTGTTC-3’和下游：5’-CAGGTGAGGGGGACATCT-3。PCR反應(yīng)總體積25μL，含引物(10 pmol/μL)各1.0μL、4×dNTP(各2.5mmol/L)2.5μL、Taq酶1U、基因組DNA溶液0.5μL、10×Buffer2.5μL，MgC121.5μL。反應(yīng)
3、條件為95℃預(yù)變性5min；95℃30S、60℃30S、72℃30S，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min。PCR產(chǎn)物用Mbo Ⅱ內(nèi)切酶在37℃水浴消化2h，用2％瓊脂糖凝膠電泳、溴化乙錠染色確定XPD751基因型。采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以x2檢驗(yàn)不同XPD751基因型之間的化療療效的差異。用SAS非條件logistic回歸模型計(jì)算比值比(OR)及其95％可信限(95％CI)，表明不同基因型個(gè)體的化療敏感性(化療有效性的預(yù)
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