ISS患兒GHR基因單核苷酸多態(tài)性的研究.pdf

1、目的： 特發(fā)性矮小(idiopathic short stature,ISS)具有復雜的遺傳背景，是基因和環(huán)境相互作用的結果。對該病染色體上易感基因的探究仍然是目前的研究熱點和努力方向。本研究通過探討生長激素受體(growth hormone receptor，GHR)基因外顯子10單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)對血清IGF-1水平的影響，進一步研究其對人體生長軸的影響，最

2、終明確GHR基因外顯子10SNPs與特發(fā)性矮小的相關性。 方法： 1．病例組和對照組血清IGF-1檢測采用放免法，試劑盒由天津九鼎醫(yī)學生物科技有限公司提供。操作按說明書，批內、批間變異系數(shù)達要求范圍。病例組與正常對照組進行組間比較。 2．采用氯仿抽提法對病例組和正常對照組進行DNA提取，所提DNA采用1％瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA。 3．針對目的基因設計并合成引物，PCR擴增目的基因，采用2％瓊脂糖凝膠電泳

3、、凝膠成像儀鑒定PCR產物。 4．PCR產物直接測序。 5．應用軟件對測序結果分析，進行SNP分型、等位基因頻率的測定。經Hardy-Weinberg遺傳平衡定律<'[1]>檢驗，確定各基因型頻率已達到遺傳平衡，具有群體代表性。 6．組間性別差異用x<'2>檢驗，年齡及血清IGF-1水平比較用t檢驗，組間基因型及等位基因頻率比較用x<'2>檢驗，其基因型及等位基因的相對危險度以優(yōu)勢比<'[2]>(Odds rat

4、io,OR)及95％可信(CI)表示。各基因型間血清IGF-1水平差異比較采用方差分析。以上數(shù)據(jù)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。 結果: 1．病例組的篩選病例組其血清GH水平均正常，甲狀腺功能正常，無染色體疾病，無慢性器質性疾病及內分泌代謝性疾病。病例組與對照組年齡、性別差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2．病例組與對照組血清IGF-1水平近似正態(tài)分布，方差齊，經t檢驗，差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)

5、。 3．GHR基因SNPs的檢測：本研究發(fā)現(xiàn)GHR基因外顯子10共有3個SNP位點改變，分別為748A→C(1544L)、437G→T(C440P)和853A→C(17579P)，與NCBI公布的相符合，NCBI公布的591C→T、601A→C在本研究人群中未檢測到。各SNPs等位基因頻率在人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡。其中位于748位核苷酸的A→C(1544L)處的單核苷酸多態(tài)性雜合度最高，為54.2％，

6、3個SNPs位點氨基酸均有極性變化。 4．GHR 基因多態(tài)性與特發(fā)性矮小的相關性矮小組748位點SNP基因型頻率的分布與對照組比較，差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，其等位基因頻率與對照組比較差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；矮小組437、853位點SNP基因型頻率的分布及等位基因頻率與對照組比較差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在437位點上，T等位基因頻率明顯升高，G等位基因頻率明顯降低；在853位點上，A等位基因頻率明顯

7、升高，C等位基因頻率明顯降低。 5．GHR基因多態(tài)性與血清IGF-1水平 (1)748位點各基因型血清IGF-1水平經方差分析，差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 (2)437位點各基因型血清IGF-1水平經方差分析顯示，各基因型間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，按基因型兩兩比較顯示，GT與GG間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；矮小組各基因型間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，按基因型兩兩比較顯示，矮小組GG

8、與TT基因型間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，GG與GT、GT、與TT基因型間差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 (3)853位點各基因型血清IGF-1水平經方差分析顯示，各基因型間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，按基因型兩兩比較顯示，AA、AC分別與CC基因型間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，AA與AC基因型間差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；矮小組各基因型間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，AA、AC分別與CC基因型間

9、差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，AA與AC基因型間差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；正常組各基因型間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，AC、CC分別與AA基因型間差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，CC與AC基因型間差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結論： 1．血清IGF-1水平不能作為特發(fā)性矮小的特異性診斷指標。 2．GHR基因外顯子10 748位點基因型頻率的分布與特發(fā)性矮小的發(fā)病無關。 3．GHR

10、基因外顯子10 748位點等位基因頻率的改變不能引起血清IGF-1水平的升高或降低。 4．GHR基因外顯子10 437位點GT、TT基因型及T等位基因是特發(fā)性矮小發(fā)的易感性基因，GG基因型及G等位基因是其發(fā)病的保護性基因。 5．GHR基因外顯子10 853位點AA、AC基因型及A等位基因是特發(fā)性矮小發(fā)病的易感性基因，CC基因型及c等位基因是其發(fā)病的保護性基因。 6．GHR．基因外顯子10 437、853位點基因型