單核苷酸多態(tài)性的電化學(xué)方法研究.pdf

1、基因片段的變異與基因疾病的產(chǎn)生有密切的關(guān)系，其中單核苷酸多態(tài)性(SNPs)是人類基因組中最常見的遺傳變異。因此，SNPs的檢測在遺傳疾病的分子基礎(chǔ)研究、臨床診斷與治療等方面具有重要意義，成為當(dāng)今分析化學(xué)與生命科學(xué)交叉研究的前沿領(lǐng)域。電化學(xué)分析方法由于其較高的靈敏性和操作簡便的特點(diǎn)，在生命科學(xué)的研究中也得到了廣泛的應(yīng)用。本論文致力于單核苷酸多態(tài)性的電化學(xué)檢測方法研究，完成了三項(xiàng)工作，實(shí)現(xiàn)了對目標(biāo)物的快速、靈敏、準(zhǔn)確檢測。主要內(nèi)容如下：

2、 1.結(jié)合DNA連接酶的高忠實(shí)性以及鏈親和素堿性磷酸酶的催化作用提出了一種新的SNP基因分型電化學(xué)檢測方法。巰基修飾的捕獲探針和生物素標(biāo)記的連接探針，與目標(biāo)序列在合適的條件下雜交，對于完全匹配的雜交體，連接反應(yīng)能夠順利進(jìn)行，酶催化銀沉積后，通過線性掃描伏安法(LSV)就可以檢測到電化學(xué)信號，對于堿基錯(cuò)配的情況，連接反應(yīng)不能進(jìn)行，因此檢測不到電化學(xué)信號，從而達(dá)到區(qū)分基因點(diǎn)突變的目的。 2.引物延伸反應(yīng)的高特異性使其成為單核苷酸

3、多態(tài)性(SNPs)基因分型最常用的方法。利用引物延伸反應(yīng)通過二茂鐵標(biāo)記的dUTP將二茂鐵引入到延伸的產(chǎn)物中去，用一條捕獲探針將延伸產(chǎn)物捕獲到電極表面，用差分脈沖伏安法(DPV)對電極表面的二茂鐵進(jìn)行檢測，實(shí)現(xiàn)SNP基因分型。應(yīng)用該方法對β-地中海貧血28位單堿基突變進(jìn)行檢測，獲得滿意的基因分型結(jié)果。該方法檢測限可達(dá)0.86fM，是一種簡便、快速、靈敏的SNP分型方法。 3.基于第二部分的工作，我們在引物延伸反應(yīng)高特異性的基礎(chǔ)上，