單核苷酸多態(tài)性核酸試紙條檢測(cè)技術(shù)的建立.pdf

1、目的：應(yīng)用核酸試紙條，建立一種能對(duì)單核苷酸多態(tài)性和單堿基突變進(jìn)行快速檢測(cè)方法。 方法：本文介紹了一種結(jié)合核酸檢測(cè)試紙條(Nucleic Acid Strip，NAS)，聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)和連接酶檢測(cè)反應(yīng)(Ligase Detection Reaction，LDR)技術(shù)而建立的一種能快速準(zhǔn)確檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms，S

2、NP)和單堿基突變的方法，即單核苷酸多態(tài)性核酸試紙條檢測(cè)技術(shù)(Single NucleotidePolymorphisms Nucleotide Strip-test，SNP-NST)。SNP-NST主要分為三個(gè)步驟：通過PCR擴(kuò)增包含SNP位點(diǎn)/單堿基突變的基因序列；用兩條特異性連接探針與擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行退火結(jié)合，并在Taq DNA ligase的作用下進(jìn)行連接反應(yīng)；對(duì)連接產(chǎn)物進(jìn)行變性后用NAS進(jìn)行檢測(cè)，只有由兩條探針連接在一起的產(chǎn)物才能

3、在NAS上顯示出紅色的條帶。我們對(duì)SNP-NST的每個(gè)步驟進(jìn)行了優(yōu)化。 結(jié)果：以SNP-NAS技術(shù)對(duì)50例乙型肝炎患者拉米夫定耐藥進(jìn)行檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果與DNA測(cè)序和PCR-RFLP檢測(cè)進(jìn)行對(duì)比，符合率分別為90％和94％。 結(jié)論：本文將PCR，IDR和NAS有機(jī)地結(jié)合在一起，建立了一種快速檢測(cè)SNP和單堿基突變的方法——SNP-NAS。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本方法不僅有很高的特異性和靈敏度，而且操作簡(jiǎn)便、快速，適合于各級(jí)醫(yī)院尤其