藥物相關(guān)基因單核苷酸多態(tài)性的電化學(xué)分析方法研究.pdf

1、單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNP)是被公認(rèn)的導(dǎo)致基因多樣性與復(fù)雜性的重要原因。β1腎上腺素能受體基因（ADRB1）發(fā)生SNP直接影響高血壓患者服用美托洛爾的降壓效應(yīng)。而維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合物亞基1（VKORC1）基因發(fā)生SNP與華法林的使用劑量有密切關(guān)系。因此，建立全新的SNP分子檢測(cè)方法可以更好地掌握針對(duì)某種藥物反應(yīng)性的個(gè)體間差異，從而實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療，降低醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn)和醫(yī)療費(fèi)用。

2、本文通過(guò)合成全新的納米材料，用于修飾電化學(xué)DNA傳感器，實(shí)現(xiàn)了對(duì)兩種比較常見(jiàn)的臨床應(yīng)用藥物相關(guān)的SNP的檢測(cè)，以期精準(zhǔn)指導(dǎo)個(gè)體化臨床用藥。研究工作分為以下兩部分：
　　第一章、應(yīng)用氧化石墨烯/二氧化鈰/鉑納米粒子作為納米信標(biāo)對(duì)β1腎上腺素能受體基因的電化學(xué)檢測(cè)
　　本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了一個(gè)基于氧化石墨烯/二氧化鈰/鉑納米粒子（GO/CeO2/PtNPs）作為納米信標(biāo)，金納米粒子/鏈霉親和素（AuNPs/SA）作為電極修飾納米材料形成

3、的 DNA傳感器，用于血清中ADRB1突變特異性檢測(cè)。首先以GO為載體，固載了大量的CeO2。接著，在其表面還原了PtNPs，合成了GO/CeO2/PtNPs獲得良好的催化性能。另外，在玻碳電極（GCE）表面沉積一層AuNPs之后修飾SA來(lái)連接生物素標(biāo)記的探針。通過(guò)各種條件優(yōu)化，制備的傳感器靈敏度較高，特異性較好，線性范圍較寬，重現(xiàn)性較好。線性范圍為分為兩段：1fM到100fM和100fM到10nM，最低檢測(cè)限為0.33fM。此外，加樣

4、回收率在99.4-101.9%之間，說(shuō)明該傳感器可以應(yīng)用于血清中ADRB1基因突變的檢測(cè)。
　　第二章、應(yīng)用富勒烯-聚酰胺-胺型樹(shù)枝狀高分子-空心鉑作為納米信標(biāo)對(duì)維生素K環(huán)氧化物還原酶復(fù)合物亞基1的電化學(xué)檢測(cè)
　　本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了一個(gè)基于富勒烯-聚酰胺-胺型樹(shù)枝狀高分子-空心鉑（C60NPs-PAMAM-PtPNPs）作為納米信標(biāo)，還原性氧化石墨烯四乙烯五胺/金納米顆粒/鏈霉親和素（rGO-TEPA/AuNPs/SA）作為電極修

5、飾納米材料形成的DNA傳感器，用于血清中VKORC1基因突變的特異性檢測(cè)。C60NPs不僅具有氧化還原活性可以作為信號(hào)物質(zhì)，而且還能作為生物分子的載體來(lái)固載PtPNPs。因此，我們合成了C60NPs-PAMAM-PtPNPs。在GCE表面修飾rGO-TEPA后再沉積一層AuNPs，接著修飾SA來(lái)連接生物素標(biāo)記的四面體DNA用于捕獲目標(biāo)DNA。通過(guò)條件優(yōu)化，傳感器的靈敏度較高，特異性較好，線性范圍較寬，重現(xiàn)性較好。線性范圍為1pM到10n