EGFR基因單核苷酸多態(tài)性與結(jié)直腸癌的相關(guān)性.pdf

1、背景與目的
　　 結(jié)直腸癌是全世界常見的惡性腫瘤之一。從全世界范圍來看,中國是結(jié)直腸癌的低發(fā)區(qū),但目前,結(jié)直腸癌在中國已是發(fā)病率居于第五位的常見惡性腫瘤且其發(fā)病率呈上升趨勢。普遍認為結(jié)直腸癌是多因素參與且相互作用的復(fù)雜疾病,涉及到一系列的病理生理反應(yīng)。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌發(fā)病的高危因素主要有個人的遺傳因素、生活方式、環(huán)境因素、藥物使用情況等。
　　 結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展的確切機制到目前仍未被完全闡明。對結(jié)直腸癌的研究涉

2、及很多方面,其中在DNA水平上,對于基因組的單核苷酸多態(tài)性與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究相對較少。
　　 單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,簡稱SNPs)是第三代遺傳標(biāo)記。目前,基因單核苷酸多態(tài)性與疾病的遺傳易感性、患者對臨床治療的敏感性、患者的預(yù)后等領(lǐng)域得到重視和深入研究,某些基因的單核苷酸多態(tài)性與腫瘤的關(guān)系已得到證實。
　　 表皮生長因子受體(epidermal growth f

3、actor receptor,簡稱EGFR)屬于ErbB受體型酪氨酸激酶家族成員,它具有酪氨酸蛋白激酶活性,能促進上皮細胞增生,與細胞的惡變密切相關(guān),其基因定位于第7號染色體短臂1區(qū)1帶至1區(qū)3帶(7p11-p13),由28個外顯子構(gòu)成。多項研究表明:EGFR與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展有相關(guān)性,EGFR基因突變與腫瘤患者的臨床病理特征、藥物療效具有相關(guān)性。
　　 目前,關(guān)于EGFR基因第15外顯子T53C位點單核苷酸多態(tài)性與疾病關(guān)系

4、的研究在國內(nèi)、外還未見報道,第13外顯子G64A位點單核苷酸多態(tài)性與疾病關(guān)系的研究在國內(nèi)報道較少。本研究采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,簡稱PCR-RFLP)方法結(jié)合DNA測序法對93例中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者外周血DNA中的EGFR基因第15外顯子T53C單核苷酸多態(tài)性位點與第13外顯子G6

5、4A單核苷酸多態(tài)性位點的基因型進行檢測,旨在探討此二位點在中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者中的基因型頻率和等位基因頻率及其與結(jié)直腸癌的相關(guān)性。
　　 材料與方法
　　 1.外周靜脈血標(biāo)本采集于無血緣關(guān)系的93例中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者,采集時間為2009年2月至2009年9月。93例結(jié)直腸癌患者均在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院行外科手術(shù)治療,于患者術(shù)前采血1ml～1.5ml。
　　 2.采用離心柱法對93例中國河南省漢族結(jié)直

6、腸癌患者的外周靜脈血基因組DNA進行抽提。
　　 3.采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)法對93例中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的EGFR基因外顯子15 T53C單核苷酸多態(tài)性位點與外顯子13 G64A單核苷酸多態(tài)性位點進行基因分型。
　　 4.采用DNA測序法對PCR-RFLP法的基因分型結(jié)果進行驗證。
　　 5.統(tǒng)計學(xué)處理:采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,對無序分類資料采用x2檢驗,以優(yōu)勢

7、比(odds ratio,OR)及其95％可信區(qū)間(95％confidence interval,95％CI)表示相對風(fēng)險度,運用Logistic回歸模型計算OR及其95％CI;對有序分類資料采用秩和檢驗,通過比較平均秩次判斷風(fēng)險度大小。統(tǒng)計檢驗中涉及單雙側(cè)概率時,采用雙側(cè)概率檢驗,取檢驗水準(zhǔn)α=0.05,對于多分類樣本中每兩類組間的比較采用Bonferroni法。
　　 結(jié)果：
　　 1.EGFR基因外顯子15 T53

8、C位點基因型T/C18例(19.35％),基因型T/T75例(80.6596)。等位基因T頻率為90.32％,等位基因C頻率為9.68％。
　　 2.EGFR基因外顯子15 T53C位點基因型分布頻率與中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學(xué)類型、腸壁浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、血道轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05)。等位基因T、C分布頻率與中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的性別、年齡

9、、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學(xué)類型、腸壁浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、血道轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05)。
　　 3.EGFR基因外顯子13 G64A位點基因型G/G26例(27.96％),基因型G/A45例(48.39％),基因型A/A22例(23.65％)。等位基因G頻率為52.15％,等位基因A頻率為47.85％。
　　 4.EGFR基因外顯子13 G64A位點基因型分布頻率與中國河南省漢族

10、結(jié)直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學(xué)類型、腸壁浸潤深度、分化程度、血道轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有相關(guān)性(P<0.05)。等位基因G、A分布頻率與中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學(xué)類型、腸壁浸潤深度、分化程度、血道轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有相關(guān)性(P<0.05)。
　　 5.EGFR基因外顯子13

11、 G64A位點,攜帶基因型G/G的中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險增加(基因型G/G、G/A與A/A比較的OR分別為5.429、1.369)。通過Bonferroni法對每兩種基因型進行比較,取校正檢驗水準(zhǔn)α'=0.017,結(jié)果為:基因型A/A與G/A問比較,P=0.937；基因型A/A與G/G間比較,P=0.015；基因型G/A與G/G間比較,P=0.010。攜帶基因型G/G的結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌TNM分期較高(基

12、因型A/A、G/A、G/G的平均秩次分別為40.80、43.03、59.12),通過Bonferroni法對每兩種基因型進行比較,取校正檢驗水準(zhǔn)α'=0.017,基因型A/A與G/A間比較,P=0.734；基因型A/A與G/G間比較,P=0.016；基因型G/A與G/G間比較,P=0.012。
　　 6.EGFR基因外顯子13 G64A位點,攜帶等位基因G的中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險增加(等位基因G與A比

13、較的OR為2.637),進行x2檢驗,x2值為7.427,P值為0.006。攜帶等位基因G的中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌TNM分期較高(等位基因A與G的平均秩次分別為83.35、102.81)。對等位基因A與G進行Wilcoxon Test,Zc值為-2.567,P值為0.010。
　　 結(jié)論：
　　 1.EGFR基因外顯子15 T53C位點單核苷酸多態(tài)性與中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫

14、瘤直徑、大體形態(tài)、組織學(xué)類型、腸壁浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、血道轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。
　　 2.EGFR基因外顯子13 G64A位點單核苷酸多態(tài)性與中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤直徑、大體形態(tài)、組織學(xué)類型、腸壁浸潤深度、分化程度、血道轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。
　　 3.EGFR基因外顯子13 G64A位點單核苷酸多態(tài)性與中國河南省漢族結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有相關(guān)性,此單