內(nèi)皮素-1受體拮抗劑(BQ-123)對大鼠肺缺血-再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在臨床肺外科工作中，為達(dá)到最大限度切除病肺和最大限度保存健康肺組織的目的，常有一部分患者需要同期施行肺動(dòng)脈成形術(shù)并支氣管袖式肺葉切除，在而此操作過程中，需要暫時(shí)阻斷肺動(dòng)脈和/或支氣管動(dòng)脈血流，由此而引起的肺缺血-再灌注損傷防治的問題，已成為胸外科醫(yī)生關(guān)注的熱點(diǎn)。缺血-再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，IRI）的防治是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究中活躍的領(lǐng)域，肺動(dòng)脈成形術(shù)需要單純阻斷肺動(dòng)脈血流，支氣管袖式肺葉切除并

2、肺動(dòng)脈成形術(shù)則需要同時(shí)阻斷肺動(dòng)脈和支氣管動(dòng)脈血流。這種阻斷血流和恢復(fù)灌注的過程，就不可避免地會(huì)引起肺臟的缺血-再灌注損傷，目前認(rèn)為，盡量縮短肺組織缺血時(shí)間是防治這種損傷的最佳方法之一?；诜闻K的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，有沒有阻斷血流相對的安全時(shí)限？解剖學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，肺有肺動(dòng)脈循環(huán)和支氣管動(dòng)脈循環(huán)雙重血流系統(tǒng)，前者是肺的功能性血管，參與氣體交換，后者是肺的營養(yǎng)性血管，供給氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)。但上述兩個(gè)系統(tǒng)之間存在著大量的相互交通、血管吻合。由此設(shè)想，無論支氣

3、管動(dòng)脈還是肺動(dòng)脈的單獨(dú)阻斷或同時(shí)阻斷所造成的肺缺血-再灌注損傷的程度，應(yīng)該是有所區(qū)別的。本研究通過建立大鼠在體肺缺血-再灌注損傷模型，分析不同缺血時(shí)段肺組織結(jié)構(gòu)和功能的變化，探討肺動(dòng)脈阻斷及肺動(dòng)脈和支氣管動(dòng)脈雙阻斷的安全時(shí)限，為臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)，我們選用內(nèi)皮素-1受體拮抗劑（BQ-123）作為干預(yù)措施，觀察其對肺缺血-再灌注損傷的保護(hù)效果。 材料和方法：健康Wistar大鼠雌雄不分，共42只，體重300±50g。隨機(jī)分為7

4、組，每組6只。各組均采用氣管插管，呼吸機(jī)輔助呼吸，左側(cè)剖胸。Ⅰ組：正常對照組，僅左側(cè)剖胸；Ⅱ組：仔細(xì)游離并阻斷左肺動(dòng)脈45min，開放肺動(dòng)脈再灌注2h；Ⅲ組：左肺動(dòng)脈阻斷60min，開放肺動(dòng)脈再灌注2h；Ⅳ組：在肺充氣狀態(tài)下結(jié)扎左側(cè)肺門30min，同時(shí)阻斷肺動(dòng)脈和支氣管動(dòng)脈血流，開放再灌注2h；Ⅴ組：左肺門結(jié)扎45min，開放再灌注2h；Ⅵ組：靜脈注射內(nèi)皮素受體拮抗劑BQ-123（1mg/kg）后，左肺動(dòng)脈阻斷60min，開放肺動(dòng)脈再灌

5、注2h；Ⅶ組：靜脈注射BQ-123（1mg/kg），左肺門結(jié)扎45min，開放再灌注2h。動(dòng)物模型的制作過程：10%水合氯醛0．3ml/100g，腹腔注射，全身麻醉。麻醉生效后仰臥位固定，氣管切開，插入氣管插管，接動(dòng)物呼吸機(jī)控制呼吸，呼吸頻率55次/分，潮氣量8ml，吸呼比1：2，吸入氣氧濃度35%。左側(cè)開胸，剪斷3、4肋骨，徹底止血。游離左肺動(dòng)脈主干，以無創(chuàng)血管夾夾閉，行肺動(dòng)脈阻斷；在肺充氣狀態(tài)下結(jié)扎左肺門，同時(shí)阻斷肺動(dòng)脈和支氣管動(dòng)脈

6、，阻斷時(shí)間完成后開放再灌注2小時(shí)，建立大鼠在體肺缺血-再灌注損傷的動(dòng)物模型。再灌注2小時(shí)后，經(jīng)頸總動(dòng)脈抽血做血?dú)夥治鰷y定PaO2、放射免疫法測定血漿中內(nèi)皮素-1（ET-1）的表達(dá)，使用POWERLAB生理記錄儀監(jiān)測左肺動(dòng)脈平均肺動(dòng)脈壓力（mPAP）；取左肺組織計(jì)算干濕比值（W/D），免疫組化技術(shù)檢測肺組織Fas、Fas-L蛋白的表達(dá)，在光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織結(jié)構(gòu)的變化以及在透射電鏡下觀察肺組織微觀結(jié)構(gòu)的改變。測定結(jié)果均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（x

7、±S）表示，數(shù)據(jù)采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，各組間比較采用單因素方差分析（oneway-ANOVA test），P<0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：Ⅱ組中W/D比值、mPAP、血漿中ET-1、Fas、Fas-L蛋白的表達(dá)及PaO2較正常對照組差異無顯著性（P>0．05），光學(xué)顯微鏡下及透射電鏡下觀察見肺組織結(jié)構(gòu)大致正常：Ⅲ組較Ⅰ組PaO2下降約60mmHg（P<0．05）、ET-1含量增加約200pg/ml、m

8、PAP上升約10mmHg、W/D比值上升、Fas、Fas-L蛋白的表達(dá)增加（P<0．05），光學(xué)顯微鏡下可見肺泡和間質(zhì)散在出血，肺間質(zhì)和肺泡腔有水腫液，肺泡腔和肺間質(zhì)內(nèi)可見大量炎性細(xì)胞聚集，電鏡下觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)可見血管內(nèi)皮凋亡，細(xì)胞核崩解，異染染色質(zhì)邊聚，顏色加深。Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)板層小體空泡化，線粒體水腫變性、嵴消失，細(xì)胞間連接增寬，伴膠原纖維大量增生：Ⅳ組中W/D比值、mPAP、血漿中ET-1、Fas、Fas-L蛋白的表達(dá)及P

9、aO2較正常對照組差異無顯著性（P>0．05），光學(xué)顯微鏡及電鏡下觀察見肺組織結(jié)構(gòu)大致正常；Ⅴ組中反映缺血-再灌注損傷的各項(xiàng)指標(biāo)W/D比值、ET-1含量、mPAP、Fas、Fas-L蛋白的表達(dá)增加（P<0．05），PaO2下降（P<0．05），光學(xué)顯微鏡及電鏡下均可見肺組織結(jié)構(gòu)的破環(huán)。在血管阻斷前，靜脈注射內(nèi)皮素-1受體拮抗劑（BQ-123）以后，Ⅵ組及Ⅶ組中反應(yīng)肺缺血-再灌注損傷的指標(biāo)W/D比值、ET-1含量、mPAP，F(xiàn)as、Fas

10、-L蛋白的表達(dá)減少（P<0．05），PaO2上升（P<0．05），光學(xué)顯微鏡下見肺間質(zhì)和肺泡腔有水腫液減少，肺泡壁腫脹不明顯、肺泡腔和肺間質(zhì)內(nèi)可見少量炎性細(xì)胞浸潤，顯示肺損傷程度大大減輕。透射電鏡下觀察肺組織顯微結(jié)構(gòu)可見內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核居中，細(xì)胞間連接無明顯增寬，膠原纖維未見增生。同時(shí)，比較Ⅱ組與Ⅴ組的檢測結(jié)果，后者W/D比值、ET-1含量、mPAP、Fas、Fas-L蛋白的表達(dá)增加（P<0．05），PaO2下降（P<0．05）

11、，光學(xué)顯微鏡下病理切片HE染色可見肺組織損傷明顯加重。提示在相同時(shí)段內(nèi)肺動(dòng)脈和支氣管動(dòng)脈雙阻斷較肺動(dòng)脈單獨(dú)阻斷更容易產(chǎn)生缺血再灌注損傷。 結(jié)論： 1．肺動(dòng)脈阻斷45分鐘、肺動(dòng)脈和支氣管動(dòng)脈雙阻斷30分鐘內(nèi)，缺血-再灌注損傷對肺組織結(jié)構(gòu)和功能的影響較?。?2．肺動(dòng)脈阻斷至60分鐘、肺動(dòng)脈和支氣管動(dòng)脈雙阻斷至45分鐘，缺血-再灌注損傷對肺組織結(jié)構(gòu)和功能有明顯的影響； 3．內(nèi)皮素-1受體拮抗劑BQ-123，對肺