鈣拮抗劑對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、細(xì)胞內(nèi)鈣超載是心肌缺血再灌注損傷的主要病理機(jī)制之一,而作為構(gòu)成缺血再灌注損傷分子通路共同分子基礎(chǔ)的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子——Egr-1,其與細(xì)胞內(nèi)鈣離子(Ca2+)之間存在非常緊密的聯(lián)系,Ca2+可通過不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑直接或間接影響Egr-1的表達(dá)。眾所周知,鈣拮抗劑防治心肌缺血再灌注損傷的主要機(jī)制是阻斷心肌細(xì)胞膜鈣通道,降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,拮抗鈣超載。而我們前期的工作也證實(shí)了F2和鈣拮抗劑維拉帕米均能通過阻斷心肌細(xì)胞膜鈣通道,降低心肌細(xì)胞內(nèi)

2、鈣離子濃度,并能抑制心肌缺血再灌注Egr-1的異常表達(dá)。因此我們提出假設(shè):具有鈣拮抗作用的化合物均有抑制Egr-1高表達(dá)的效應(yīng)。為了驗證這一假設(shè),進(jìn)一步探討鈣拮抗劑的共性作用,本實(shí)驗通過建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,運(yùn)用三種傳統(tǒng)的鈣拮抗劑,觀察其對Egr-1mRNA及Egr-1蛋白表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討其分子生物學(xué)機(jī)制。同時通過測定心肌超氧化物岐化酶、丙二醛、髓過氧化物酶的變化觀察鈣拮抗劑對氧自由基、脂質(zhì)過氧化及中性粒細(xì)胞浸潤的影響;

3、通過測定血清肌酸激酶及乳酸脫氫酶的活性觀察鈣拮抗劑對心臟損傷的保護(hù)情況。
　　方法:
　　1.心肌缺血再灌注模型的建立:手術(shù)結(jié)扎大鼠冠狀動脈左前降支造成心肌缺血60min后解除結(jié)扎再灌注180min。
　　2.實(shí)驗分組:大鼠隨機(jī)分成六組:假手術(shù)(Sham)組即對照(control)組、缺血再灌注(I/R)組、溶劑(DMSO)組、維拉帕米(Ver)組、地爾硫卓(Dil)組和硝苯地平(Nif)組。除 Sham組外,其余各組

4、均做缺血再灌注(I/R)模型。維拉帕米(Ver)、地爾硫卓(Dil)和硝苯地平(Nif)的劑量分別為0.5mg/kg、0.75mg/kg、0.2mg/kg,實(shí)驗結(jié)束后,取結(jié)扎線以下左心室缺血心肌組織進(jìn)行測定。
　　3.用Western blot法測定心肌組織中Egr-1蛋白水平。
　　4.RT-PCR法測定心肌組織Egr-1 mRNA的水平。
　　5.比色法測定大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)的活性和大鼠

5、心肌組織髓過氧化物酶(MPO)的活性;硫代巴比妥酸法測定心肌組織丙二醛(MDA)的含量;黃嘌呤氧化酶法測定心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)的活性。
　　結(jié)果:
　　1. Ver、Dil、Nif對缺血再灌注心肌組織Egr-1 mRNA表達(dá)水平的影響RT-PCR結(jié)果顯示:與Control組比,I/R組、DMSO組缺血再灌注心肌組織Egr-1mRNA的表達(dá)水平明顯增高(P<0.05);與I/R組及DMSO組比,Ver、Dil、Ni

6、f組Egr-1mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)(P<0.05);I/R組與DMSO組比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　2. Ver、Dil、Nif對缺血再灌注心肌組織Egr-1蛋白表達(dá)水平的影響Western-blot結(jié)果顯示:與Control組比,I/R組、DMSO組缺血再灌注心肌組織Egr-1蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05);與I/R組及DMSO組比,Ver、Dil、Nif組Egr-1蛋白表達(dá)明顯減弱(P<0.05);I/R組與D

7、MSO組比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3. Ver、Dil、Nif對缺血再灌注心肌組織MPO、SOD活性和MDA含量的影響與Control組比,I/R組、DMSO組MPO活性明顯升高(P<0.05)、MDA含量明顯升高(P<0.05)、SOD活性明顯降低(P<0.05);與I/R組及DMSO組比,Ver、Dil、Nif能有效降低缺血再灌注心肌組織中MPO的活性(P<0.05)和MDA的含量(P<0.05),保護(hù)SOD的活性

8、(P<0.05);I/R組與DMSO組比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　4. Ver、Dil、Nif對血清中LDH、CK活性的影響與Control組比,I/R組、DMSO組血清中LDH、CK的活性顯著升高(P<0.05);與I/R組及DMSO組比,Ver、Dil、Nif組LDH、CK的活性明顯降低(P<0.05);I/R組與DMSO組比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　維拉帕米、地爾硫卓和硝苯地平均可