鈣拮抗劑對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制的研究.pdf

1、細(xì)胞內(nèi)鈣超載是心肌缺血再灌注損傷的主要病理機(jī)制之一,而作為構(gòu)成缺血再灌注損傷分子通路共同分子基礎(chǔ)的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子——Egr-1,其與細(xì)胞內(nèi)鈣離子(Ca2+)之間存在非常緊密的聯(lián)系,Ca2+可通過不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑直接或間接影響Egr-1的表達(dá)。眾所周知,鈣拮抗劑防治心肌缺血再灌注損傷的主要機(jī)制是阻斷心肌細(xì)胞膜鈣通道,降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,拮抗鈣超載。而我們前期的工作也證實(shí)了F2和鈣拮抗劑維拉帕米均能通過阻斷心肌細(xì)胞膜鈣通道,降低心肌細(xì)胞內(nèi)

2、鈣離子濃度,并能抑制心肌缺血再灌注Egr-1的異常表達(dá)。因此我們提出假設(shè):具有鈣拮抗作用的化合物均有抑制Egr-1高表達(dá)的效應(yīng)。為了驗(yàn)證這一假設(shè),進(jìn)一步探討鈣拮抗劑的共性作用,本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,運(yùn)用三種傳統(tǒng)的鈣拮抗劑,觀察其對(duì)Egr-1mRNA及Egr-1蛋白表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討其分子生物學(xué)機(jī)制。同時(shí)通過測(cè)定心肌超氧化物岐化酶、丙二醛、髓過氧化物酶的變化觀察鈣拮抗劑對(duì)氧自由基、脂質(zhì)過氧化及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的影響;

3、通過測(cè)定血清肌酸激酶及乳酸脫氫酶的活性觀察鈣拮抗劑對(duì)心臟損傷的保護(hù)情況。
　　方法:
　　1.心肌缺血再灌注模型的建立:手術(shù)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支造成心肌缺血60min后解除結(jié)扎再灌注180min。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組:大鼠隨機(jī)分成六組:假手術(shù)(Sham)組即對(duì)照(control)組、缺血再灌注(I/R)組、溶劑(DMSO)組、維拉帕米(Ver)組、地爾硫卓(Dil)組和硝苯地平(Nif)組。除 Sham組外,其余各組

4、均做缺血再灌注(I/R)模型。維拉帕米(Ver)、地爾硫卓(Dil)和硝苯地平(Nif)的劑量分別為0.5mg/kg、0.75mg/kg、0.2mg/kg,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取結(jié)扎線以下左心室缺血心肌組織進(jìn)行測(cè)定。
　　3.用Western blot法測(cè)定心肌組織中Egr-1蛋白水平。
　　4.RT-PCR法測(cè)定心肌組織Egr-1 mRNA的水平。
　　5.比色法測(cè)定大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)的活性和大鼠

5、心肌組織髓過氧化物酶(MPO)的活性;硫代巴比妥酸法測(cè)定心肌組織丙二醛(MDA)的含量;黃嘌呤氧化酶法測(cè)定心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)的活性。
　　結(jié)果:
　　1. Ver、Dil、Nif對(duì)缺血再灌注心肌組織Egr-1 mRNA表達(dá)水平的影響RT-PCR結(jié)果顯示:與Control組比,I/R組、DMSO組缺血再灌注心肌組織Egr-1mRNA的表達(dá)水平明顯增高(P<0.05);與I/R組及DMSO組比,Ver、Dil、Ni

6、f組Egr-1mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)(P<0.05);I/R組與DMSO組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2. Ver、Dil、Nif對(duì)缺血再灌注心肌組織Egr-1蛋白表達(dá)水平的影響Western-blot結(jié)果顯示:與Control組比,I/R組、DMSO組缺血再灌注心肌組織Egr-1蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05);與I/R組及DMSO組比,Ver、Dil、Nif組Egr-1蛋白表達(dá)明顯減弱(P<0.05);I/R組與D

7、MSO組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3. Ver、Dil、Nif對(duì)缺血再灌注心肌組織MPO、SOD活性和MDA含量的影響與Control組比,I/R組、DMSO組MPO活性明顯升高(P<0.05)、MDA含量明顯升高(P<0.05)、SOD活性明顯降低(P<0.05);與I/R組及DMSO組比,Ver、Dil、Nif能有效降低缺血再灌注心肌組織中MPO的活性(P<0.05)和MDA的含量(P<0.05),保護(hù)SOD的活性

8、(P<0.05);I/R組與DMSO組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　4. Ver、Dil、Nif對(duì)血清中LDH、CK活性的影響與Control組比,I/R組、DMSO組血清中LDH、CK的活性顯著升高(P<0.05);與I/R組及DMSO組比,Ver、Dil、Nif組LDH、CK的活性明顯降低(P<0.05);I/R組與DMSO組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　維拉帕米、地爾硫卓和硝苯地平均可