酒精性肝鐵過(guò)載中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)hepcidin的調(diào)控及槲皮素的干預(yù)探討.pdf

1、目的:1.以乙醇和/或鐵染毒小鼠為研究對(duì)象,探討酒精性肝鐵過(guò)載時(shí)肝臟氧化損傷程度的變化,以及槲皮素的保護(hù)作用。2.初步探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否參與酒精和/或鐵染毒小鼠肝鐵過(guò)載時(shí)鐵調(diào)素(hepcidin)的調(diào)控,以及槲皮素的拮抗作用。
　　方法:120只小鼠按體重隨機(jī)分為8組,分別為正常對(duì)照組、酒精對(duì)照組、槲皮素對(duì)照組、槲皮素+酒精組、高鐵對(duì)照組、酒精+高鐵組、槲皮素+高鐵組、槲皮素+酒精+高鐵組。小鼠能量配對(duì)喂養(yǎng)15周建立酒精性肝鐵過(guò)載

2、模型后,隔夜停食,次日稱重后處死取血,分離血清分析其ALT、AST水平;迅速剝離肝臟稱重,計(jì)算肝臟體重比;取0.5g大葉肝樣以原子吸收分光光度法測(cè)定肝臟中總鐵水平;DHE探針?lè)跤裏晒怙@微鏡分析其ROS水平。實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timePCR)檢測(cè)各組小鼠肝臟組織中鐵調(diào)素(hepcidin)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucoseregulatedprotein78,GRP78)、X盒結(jié)合蛋白1(XBP1)mRNA表達(dá)水平;免疫印

3、記法(WesternBlot)測(cè)定各組小鼠GRP78、XBPS/XBPU蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.能量配對(duì)喂養(yǎng)15周后,各酒精組小鼠體重輕于各非酒精組小鼠,高鐵和槲皮素對(duì)小鼠體重沒(méi)有影響;
　　2.與正常對(duì)照組相比,酒精與鐵單獨(dú)染毒后小鼠肝臟體重比、血清ALT和AST上升;酒精和鐵的聯(lián)合染毒組肝臟體重比進(jìn)一步增加,血清ALT和AST水平升高更為明顯;與相應(yīng)對(duì)照組相比,槲皮素可以明顯降低酒精和/或鐵單獨(dú)或者聯(lián)合

4、作用引起的肝臟體重比上升,及血清ALT、AST水平。
　　3.酒精、鐵單獨(dú)均可導(dǎo)致肝臟總鐵含量和ROS水平升高,二者聯(lián)合染毒后肝臟總鐵含量和ROS水平增加更為顯著;槲皮素干預(yù)可減輕酒精和/或鐵染毒所致的肝鐵沉積,降低其ROS水平,但槲皮素本身對(duì)肝臟總鐵和ROS水平?jīng)]有影響。
　　4.HepcidinmRNA表達(dá):長(zhǎng)期酒精攝入降低了肝臟中hepcidinmRNA水平,但高鐵染毒則明顯升高其表達(dá)水平,兩者聯(lián)合作用后肝hepcid

5、inmRNA的表達(dá)低于高鐵對(duì)照組,但仍高于正常對(duì)照組;槲皮素干預(yù)抑制了酒精對(duì)hepcidin下調(diào)及鐵對(duì)hepcidin的誘導(dǎo)。
　　5.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;長(zhǎng)期酒精尤其是鐵染毒后小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志XBPS/XBPTmRNA和GRP78的mRNA和蛋白表達(dá)水平升高,聯(lián)合染毒后應(yīng)激更為明顯;槲皮素干預(yù)抑制了酒精尤其是鐵誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,對(duì)聯(lián)合染毒小鼠也有明顯的抑制作用。
　　結(jié)論:槲皮素對(duì)酒精與鐵單獨(dú)或者聯(lián)合染毒小鼠的肝臟氧化損傷及鐵沉