PD運動并發(fā)癥發(fā)病中NR1亞基及ERK通路的研究.pdf

1、帕金森病(PD)是一種老年人常見的神經系統(tǒng)變性疾病，紋狀體多巴胺含量顯著性減少為其特征性的生化特征。目前左旋多巴仍然是是治療PD的金標準，但長期使用左旋多巴會引起諸多運動并發(fā)癥，異動癥與癥狀波動就是常見的現象，至今還無法得到滿意的解決，其機制尚不清楚。許多研究者認為外源性多巴藥物易造成對紋狀體棘狀神經元上多巴胺受體異常的波動性刺激。多巴胺受體和谷氨酸受體共定位于紋狀體棘狀神經元上。波動性的多巴胺受體刺激可能引起棘狀神經元信號轉導通路的變

2、化，進而影響谷氨酸受體的狀態(tài)及突觸傳遞效率。紋狀體神經元上反應性改變導致了左旋多巴誘發(fā)的運動并發(fā)癥的出現。本文對PD運動并發(fā)癥發(fā)病中NR1亞基及ERK通路進行了研究。本研究分為五個部分： 第一部分：左旋多巴誘發(fā)帕金森病運動并發(fā)癥大鼠模型的建立和評價。通過6-羥基多巴立體定向注射至SD大鼠前腦內側束建立帕金森病模型，然后左旋多巴甲酯腹腔注射治療(50 mg/kg加12.5 mg/kg芐絲肼，每天2次)3周，觀察異常不自主運動的情況

3、及旋轉行為。經左旋多巴治療后，帕金森病大鼠出現了異常不自主運動，包括刻板動作和對側旋轉行為；帕金森病大鼠呈現劑峰旋轉圈數逐漸增加、旋轉反應時間逐漸縮短的趨勢，與人類異動癥、癥狀波動具有相似特征。NMDA受體拮抗劑MK-801能延長左旋多巴所誘導的PD大鼠旋轉時間的縮短，并減輕劑峰旋轉次數。上述研究表明，我們成功建立了帕金森病運動并發(fā)癥大鼠模型，為進一步研究其機制奠定了基礎。 第二部分：帕金森病運動并發(fā)癥中NR1亞細胞分布及磷酸化

4、狀況的實驗研究。采用蛋白印跡法檢測紋狀體區(qū)NR1亞細胞分布及磷酸化NR1S890、NR1S896、NR1S897的表達情況。PD大鼠損傷側紋狀體細胞膜上NR1和NR1S890、NR1S896磷酸化的數量明顯減少，而NRIS897磷酸化的數量無顯著變化；長期左旋多巴處理后使損傷側紋狀體細胞膜上NR1和NR1S890、NR1S896、NR1S897磷酸化的數量明顯上調；然而損傷側紋狀體NR1總蛋白數量未發(fā)生明顯變化。上述研究表明長期左旋多巴

5、作用導致NR1亞細胞分布與磷酸化狀態(tài)出現明顯改變，谷氨酸信號被激活了，左旋多巴誘發(fā)的運動并發(fā)癥可能與NR1的特性改變有關。 第三部分：急性與長期左旋多巴作用后撤藥對PD大鼠行為學及NR1影響的比較研究。采用蛋白印跡法檢測紋狀體區(qū)NR1亞細胞分布及磷酸化NR1S890、NR1S896、NR1S897的表達情況。急性左旋多巴作用使PD大鼠損傷側紋狀體細胞膜上降低的NR1和NR1S890、NR1S896、NR1S897磷酸化數量可輕度

6、升高，但撤藥后很快恢復，不能長時間維持，旋轉反應時間與劑峰旋轉次數亦沒有發(fā)生改變；而長期左旋多巴作用不僅引起旋轉反應時間的縮短、劑峰旋轉次數明顯升高，同時使損傷側紋狀體膜上的NR1、磷酸化NR1S890、NR1S896、NR1S897表達明顯升高，且撤藥1天后膜上的NR1、磷酸化NR1S890、NR1S896、NR1S897表達量仍維持在高水平，同時旋轉反應時間與劑峰旋轉次數還維持在那種改變的趨勢。上述研究表明長期左旋多巴作用后撤藥引起

7、的這種長期運動反應現象可能與NR1特性的長期改變有關。 第四部分：蛋白激酶C抑制劑改善帕金森病運動并發(fā)癥的研究。通過6-羥多巴胺立體定向注射至大鼠前腦內側束建立帕金森病(PD)動物模型。對模型成功的PD大鼠接受每日兩次左旋多巴(50mg/kg加12.5 mg/kg芐絲肼)腹腔注射，持續(xù)22天。在第23天左旋多巴注射前，2組PD大鼠給予他莫昔芬或溶劑處理。評估旋轉反應時間及劑峰旋轉圈數；采用蛋白印跡法檢測紋狀體區(qū)NR1和NR1S8

8、90、NR1S896表達情況。結果顯示PKC抑制劑他莫昔芬逆轉了左旋多巴所誘導的PD大鼠旋轉時間的縮短，減輕了劑峰旋轉次數；此外，他莫昔芬能調節(jié)與運動并發(fā)癥密切相關的NR1的亞細胞分布，且使NR1S890、NR1S896的磷酸化水平明顯降低。研究表明長期左旋多巴作用激活了紋狀體棘狀神經元內絲氨酸激酶PKC，并導致谷氨酸受體磷酸化，從而出現了運動并發(fā)癥；抑制絲氨酸激酶(如PKC)活性的藥物可能是治療帕金森病運動并發(fā)癥的一種新方式。

9、 第五部分：細胞外信號調節(jié)激酶通路在帕金森病運動并發(fā)癥中的作用。通過6-羥多巴胺立體定向注射至大鼠前腦內側束建立帕金森病(-PD)動物模型。對建模成功的PD大鼠每日2次左旋多巴(50mg/kg加12.5mg/kg芐絲肼)腹腔注射，持續(xù)22 d。在第23天注射左旋多巴前，給予PD大鼠ERK特異性的抑制劑PD98059處理。評估旋轉反應時間及劑峰旋轉圈數，采用蛋白印跡法檢測紋狀體區(qū)ERK1/2磷酸化表達情況。結果顯示長期使用左旋多巴處理使P