大腸桿菌生產(chǎn)藥物蛋白的系統(tǒng)優(yōu)化研究.pdf

1、大腸桿菌表達系統(tǒng)是基因工程中應用最廣泛的也是最有效的表達重組蛋白的系統(tǒng)。大腸桿菌是目前遺傳和生化背景最清晰的有機體，它良好的研究背景、易生長易操作的優(yōu)點使其成為表達外源蛋白的首選系統(tǒng)。用傳統(tǒng)方法難以制取的蛋白質、細胞因子等新型藥物可以在大腸桿菌中大量表達生產(chǎn)。目前很多商品化的藥用蛋白如胰島素、干擾素、生長因子等都是用大腸桿菌系統(tǒng)生產(chǎn)的，占所有藥用蛋白的三分之一。 促紅細胞生成素(EPO)是由腎臟和肝臟分泌的能促進紅細胞生成的激素

2、。利用基因工程研制成功的重組人紅細胞生成素(rhEPO)價格相對較低，用于治療腎性貧血取得了令人矚目的療效。干擾素-β(Interferon-β)是由成纖維細胞受病毒感染或IFN誘生所產(chǎn)生的一類具有生物活性的糖蛋白，能通過與靶細胞表面受體結合干擾人體內病毒復制和繁殖，是一種臨床治療病毒性疾病和腫瘤的有效生物反應調節(jié)劑。 本實驗對大腸桿菌表達系統(tǒng)中宿主菌、質粒和表達條件進行優(yōu)化，選擇EPO和IFN-β作為目的蛋白。在宿主菌的選擇上

3、，用大腸桿菌入DE3溶原菌BL21(DE3)和能編碼表達少量T7溶菌酶的BL21(DE3)/pLys兩種菌株。載體在pET系列表達載體上中篩選。同時為消除稀有密碼子對表達的影響，目的蛋白EPO和IFN-β的基因用化學合成的方法得到。在表達條件的篩選上，用正交試驗設計確定各種表達條件的影響。構建成功的表達載體在宿主菌中誘導后，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測，EPO和IFN-β表達量均在20％以上。正交試驗結果分析后，選定0.8M IPTG、O