接枝MPC鈦板聯(lián)合外周使用青霉素對(duì)菌膜形成的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證在體內(nèi)環(huán)境中接枝MPC的鈦板聯(lián)合外周使用青霉素是否具有進(jìn)一步增強(qiáng)MPC對(duì)細(xì)菌生物膜形成的抑制作用及MPC抗細(xì)菌黏附的程度。
　　方法：取直徑為1cm厚度為0.8mm的圓形醫(yī)用鈦板86枚隨機(jī)分成兩組，每組43枚，其中一組經(jīng)一系列化學(xué)接枝方法將MPC接枝到醫(yī)用鈦板表面，另外一組43枚鈦板不接枝，將這86枚醫(yī)用鈦板分別置入隨機(jī)分配好的四組每組7只的健康成年SD級(jí)大鼠（雌雄不限）的背部肌肉組織中，A組接枝MPC的鈦

2、板聯(lián)合使用青霉素、B組接枝MPC的鈦板未使用青霉素、C組未接枝MPC的鈦板使用青霉素、D組未接枝MPC的鈦板未使用青霉素組四個(gè)組，每只大鼠體內(nèi)放置相應(yīng)的3枚鈦板;同時(shí)將事先培養(yǎng)好的標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌配成107 CFU/ml數(shù)量級(jí)懸濁液在手術(shù)過(guò)程中分別注入醫(yī)用鈦板周圍軟組織中，使其塑造一個(gè)局部感染模型，按時(shí)注射青霉素或生理鹽水，由于生物膜形成時(shí)間為1～2天，手術(shù)后24小時(shí)在每組中隨機(jī)處死一只大鼠取出醫(yī)用鈦板一枚用掃描電子顯微鏡(SEM)觀

3、察細(xì)菌粘附數(shù)量及生物膜形態(tài)，一枚用通過(guò)刀豆球蛋白A/碘化丙啶(FITC-ConA/PI)進(jìn)行胞外多糖及細(xì)胞核雙染色激光共聚焦顯微鏡(CLSM)觀察生物膜形態(tài);48小時(shí)后將剩余的大鼠全部處死，取出的每只大鼠體內(nèi)的3枚鈦板1枚用CLSM觀察生物膜生長(zhǎng)情況;1枚用SEM觀察生物膜形態(tài)，1枚超聲洗滌浮游菌，培養(yǎng)24小時(shí)后測(cè)其活菌數(shù)量行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、在SEM下接枝MPC后的鈦板表面較未接枝者更光滑、平坦;在相同的時(shí)

4、間段相同的高倍視野下細(xì)菌粘附數(shù)量變化為A組＜B組≈C組＜D組;在動(dòng)物體內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)后在高倍鏡下D組呈現(xiàn)明顯的菌膜生成，細(xì)菌粘附量較多;B、C組有少量菌膜生成細(xì)菌的粘附量也相應(yīng)的減少;A組只有微量細(xì)菌粘附，未見(jiàn)明顯的生物膜形成。
　　2、在相同時(shí)間段用CLSM觀察發(fā)現(xiàn)D組出現(xiàn)細(xì)菌、菌膜的數(shù)量最多，鋪滿整個(gè)視野，A組最少視野內(nèi)呈零星散在分布，B、C組均稍多。
　　3、各組鈦板經(jīng)超聲洗脫生物膜內(nèi)活菌體外培養(yǎng)24小時(shí)后活菌數(shù)量A組