HER-2-neu小分子干擾RNA對(duì)腦膜瘤細(xì)胞增殖活性的影響.pdf

1、目的:
　　本課題將化學(xué)合成的特異性HER-2/neu小分子干擾RNA(HER-2 siRNA)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至HER-2（人表皮生長(zhǎng)因子受體-2）陽(yáng)性的原代培養(yǎng)的人腦膜瘤細(xì)胞中，觀察其對(duì)離體腦膜瘤細(xì)胞增殖活性的影響。
　　方法:
　　本課題收集外科手術(shù)切除的新鮮人腦膜瘤組織進(jìn)行原代培養(yǎng)，用免疫細(xì)胞化學(xué)法篩選出HER-2抗體陽(yáng)性的病例作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，然后將化學(xué)合成的特異性HER-2 siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的HER-2陽(yáng)性

2、的人腦膜瘤細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分為四組:特異性HER-2 siRNA組;陰性對(duì)照siRNA組;脂質(zhì)體組;細(xì)胞對(duì)照組。用MTT法直接測(cè)定轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細(xì)胞增殖活性的改變;用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細(xì)胞中HER-2 mRNA的水平;采用免疫細(xì)胞化學(xué)法(ICC)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后腦膜瘤細(xì)胞中HER-2蛋白的水平，以及反映細(xì)胞增殖活性的Ki-67蛋白水平;Western Blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染后腦膜瘤細(xì)胞中HER-2蛋

3、白的變化。探討靶向阻斷HER-2基因后腦膜瘤在細(xì)胞水平、RNA水平和蛋白水平表達(dá)的改變，從而觀察HER-2基因與腦膜瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　特異性HER-2 siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的人腦膜瘤細(xì)胞后，MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)特異性HER-2 siRNA從轉(zhuǎn)染后48h開始對(duì)原代培養(yǎng)的人腦膜瘤細(xì)胞有抑制作用，其中轉(zhuǎn)染后72h的抑制作用最強(qiáng)，細(xì)胞增殖抑制率可達(dá)50.08％，轉(zhuǎn)染后96h的抑制作用與轉(zhuǎn)染后72h比較沒

4、有顯著差異;從RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，轉(zhuǎn)染后72h，特異性HER-2 siRNA組腦膜瘤細(xì)胞中的HER-2 mRNA與GAPDH比值（即HER-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量）比空白對(duì)照組明顯降低;轉(zhuǎn)染后72h，免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示特異性HER-2 siRNA組腦膜瘤細(xì)胞中HER-2蛋白和Ki-67蛋白的表達(dá)較轉(zhuǎn)染前明顯減少;轉(zhuǎn)染后72h，從Westem Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，特異性HER-2 siRNA組腦膜瘤細(xì)胞中HER-2蛋白與